Sitokrom P450 2C9 (CYP2C9) geninde polimorfizm analizi

Abstract

6. ÖZET Sitokrom P450 CYP2C9 kliniksel olarak önemli ilaçlardan olan phenytoin, tolbutamide, warfarin, hexobarbital, tienilik asit ve birçok non-steroid anti-enflamatuar ilaçların metabolize olmasında rol oynayan bir enzimdir. Yapılan çalışmalar sonucu aminoasit kompozisyonundaki bir değişikliğin bu enzimin hem aktivitesinde ve hem de substrat spesifitesinde önemli bir etki oluşturabileceği belirtilmektedir. Tek baz değişikliklikleri proteindeki bir aminoasidi bir başka aminoaside değiştirebilir veya bir stop kodonunun oluşumu gibi değişikliklere sebebiyet verebilir. Bu çalışmamızda 150 DNA örneğinde CYP450 2C9 geninin toplam 9 eksonu için PCR amplifîkasyonu, SSCP, heterodupleks analizi ve PCR-RFLP analiz metodlarmı kullanarak olası DNA polimorfîzmlerini tespit etmeyi amaçladık. Tüm örneklerin PCR amplifîkasyonu, SSCP, heterodupleks ve PCR-RFLP analizleri sonucunda 3. eksondaki T4i6->C (Cys 144-» Arg) mutasyonu için 27 DNA örneğinin heterozigot mutant (-/+), 2 DNA örneğinin ise homozigot mutant (+/+) oldukları tespit edildi. Bütün örneklerin yapılan PCR amplifîkasyonu, SSCP, heterodupleks ve PCR- RFLP analizleri sonucu 37 kişinin ekson T deki Ci06i-»A (Leu 359 -» 52Üe) mutasyonu için heterozigot mutant (-/+), l'nin ise homozigot mutant (+/+) olduğu tespit edildi. Diğer eksonlar için yapılan analizler sonucu herhangi bir mutasyon tespit edilmedi. 53

7. SUMMARY Cytochrome P450 CYP2C9 can metabolise a wide variety of clinical important drugs, including phenytoin, tolbutamide, warfarin, hexobarbital, tienilic acid and a large number of non-steroidal anti inflammatory drugs. Previous studies have shown that even relatively conservative changes in the amino acid composition of this enzyme can affect both its activity and substrate specificity. A base change may change an amino acid to another amino acid in the protein, or can create a stop codon. İn this study DNA samples from 150 individual were screened for DNA polymorphism by amplifying each of the 9 exons and then performing SSCP analysis, heteroduplex analysis and PCR-RFLP analysis. All DNA samples were amplified by PCR and screened by SSCP analysis, heteroduplex analysis and PCR-RFLP analysis and 27 samples showed heterozygous, 2 samples showed homozygous mutant result for T416->C (Cys 144-^ Arg) mutation in exon 3. After amplification of DNA samples for CI 061 -»A (Leu 359 -» île) mutation in exon 7 samples were screened by SSCP analysis, heteroduplex analysis and PCR-RFLP analysis. 37 samples showed heterozygous, 1 samples showed homozygous mutant result. After analysis no mutations could be detected in other exons. 54