Glukoz 6-fosfat dehidrogenaz enziminin maydanoz (petroselinum hortense mill.) ve lahana (brassica oleracea L.) bitkilerinden saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı pestisitler ile antibiyotiklerin enzim üzerindeki etkilerinin incelenmesi

Abstract

ÖZET Pentoz fosfat metabolik yolunun anahtar enzimi olan glukoz 6-fosfat dehidrogenaz enzimi (D-glukoz 6-fosfat: NADP+ oksidoredüktaz, EC 1.1.1.49), maydanoz (Petroselinum hortense Mili) ve lahanadan (Brasicca olerace L) saflaştırıldı. Maydanoz (Petroselinum hortense Mili) enzimi, amonyum sülfat çöktürmesini takiben iyon değişim kromotografisi ile % 8,7 verimle, 2,146 EU/mg protein spesifik aktiviteye sahip olarak 58 kat saflaştırıldı. Enzimin molekül ağırlığı jel fıltrasyon kromatografısi ile 77,6 kdal, SDS- poliakrilamid jel elektroforezi ile 79,3 kdal olarak bulundu. Lahana (Brasicca olerace L) glukoz 6-fosfat dehidrogenaz enzimi, amonyum sülfat çöktürmesi yöntemiyle % 35,1 verimle, 0,903 EU/mg protein'lik bir spesifik aktiviteye sahip olarak 1,3 kat saflaştırıldı. Enzimin molekül ağırlığı jel fıltrasyon kromotografisi yöntemi ile 49,3 kdal bulundu. Her iki kaynaktan saflaştırüan enzimin optimum pH'sı 8,0 olarak gözlendi. Beutler'in spektrofotometrik metoduna göre yapılan kinetik analizler sonucu, maydanoz ve lahana G6PD enzimlerinin KM değerleri sırasıyla, NADP + için 0,000162 M, 0,00028 M, glukoz 6-fosfat için 0,251 M, 1,196 M, Vmax değerleri sırasıyla NADP + için 0,541 EÜ/ml, 0,191 EÜ/ml; glukoz 6-fosfat için 0,082 EÜ/ml ve 0,133 EÜ/ml olarak bulundu. Ayrıca, bazı zirai pestisitler ve iki antibiyotiğin her iki maydanoz ve lahana enzimleri üzerindeki in vitro etkileri araştırıldı. % Aktivite-[Pestisit] ve % Aktivite- [Antibiyotik] grafikleri çizildi.

11 SUMMARY Glucose 6-phosphate dehydrogenase (D-glucose 6-phophate: NADP+ oxidoreductase, EC 1.1.1.49), the key enzyme enzyme of pentose phosphate pathway, was purified from parsley {Petroselinum hortense Mill) and cabbage(i?r asicca oleracea L). 58 fold purification of the parsley enzyme was achieved by ion-exchange chromatography following ammonium sulphate precipitation with 8.7 % yield a specific activity of 2.146 EU/mg protein. The molecular weight of the enzyme was found to be 77.6 kdal by gel filtration chromatography, 79.3 kdal by SDS polyacrylamide gel electrophoresis. Cabbage glucose 6-phosphate dehydrogenase^ 6-PD) was partially, 1.3 fold, purified by ammonium sulphate precipitation method with 35.1 % yield and a specific activity of 0,903 EU/ mg protein. The molecular weight of the enzyme was found as 49.3 kdal by gel filtration chromatography. Optimum pH of the enzyme from both sources was observed as 8.0. Kinetic analyses, which were performed according to Beutler's spectrophotometric method, showed Km values of parsley and cabbage G 6-PDs for NADP+, 1.62xl0`4 M and 2.8xl0`4 M; and for glucose 6-P, 2.51x1ü`1 M and 1,196 M; and Vmax for NADP+, 0.541 EU/ml and 0.191 EU/ml, and for glucose 6-P, 0.082 and 0.133 EU/ml, respectively. Besides these, in vitro effects of some agricultural pesticides and two antibiotics on this parsley and cabbage enzyme were also investigated and % activity graphs were plotted.