Sığır pankreas alkali fosfatazının saflaştırılması, fizikokimyasal ve kinetik özelliklerinin araştırılması

Abstract

ÖZET Bu çalışmada sığır pankreasından izole edilerek kısmen saf laştırılan ALP* m kinetik ve bazı fizikokimyasal özellikleri incelenmiştir. Önce enzimin p-nitrafenilfosfat substratı için Michaeles-Menten ve Lineweaver-Burk grafikleri çizilerek % değeri hesaplanmıştır. Daha sonra isi/ üre, DL-fenil- alanin, pH ve değişik tamponların ALP üzerindeki etkileri araştırılmıştır. o Pankreastan kısmen saf laştırılan ALP' in 56 C ve üze rindeki sıcaklıklarda ısıya dayanıksız olduğu ve 2 M üre ile muamele edilip 15 dakika bekletildiği zaman aktivitesinin %83 ünü kaybettiği görülmüştür. 10 mM DL-fenilalaninin zamana bağlı olarak enzimi inhibe ettiği, fakat enzimin DL-fenilalanine incebarsak izoenzimi kadar hassas olmadığı tesbit edilmiştir. DL-fenilalininin değişen p-nitrofenil fosfat kosant- rasyonlarmda enzim üzerine unkompetitiv bir inhibisyon yaptığı görülmüştür. ALP üzerine pH nın ve tamponların etkisi araştırılmış, enzim için optimum pH aralığının 10.3-10.8 arasında değiş tiği tesbit edilmiştir. Ayrıca kullanılan tamponlardan +2 Ammediol tampon ve Mg mevcudiyetinde enzim aktivitesinin yüksek olduğu görülmüştür. -67-