Fare genomunda bulunan ve glikojen yıkımında görev alan enzim genlerinin cDNA`larının üretilmesi, antisens mRNA üretimi ve in situ hibridizasyonu ile gen ekspresyon analizi

Abstract

Bu çalışmada fare genomunda bulunan ve glikojen yıkımında görev alan amilo-1,6-glukosidaz, 4-alfa glukanotransferaz (Agl), beyin glikojen fosforilaz (Pygb) ve kasglikojen fosforilaz (Pygm) genlerinin 14,5 günlük fare embriyosu dokularındaotomatik robot kullanılarak in situ hibridizasyon tekniği ile gen ekspresyonanalizleri yapılmıştır. Bu amaçla sözkonusu enzim genleri için (Agl, Pygb, Pygm)spesifik primerler dizayn edildi. Bu primerler kullanılarak cDNA probları hazırlandı.Daha sonra bu cDNA problarından in vitro şartlarda antisens mRNA'lar üretildi.Üretilen antisens mRNA kullanılarak 14,5 günlük fare embryosu dokularında in situhibridizasyon yapıldı. Agl'nin kas, göz lensi, spinal kort, dil, kalp, chroid plexus,pons ve ön beyinde; Pygb'nin beyin, kafatası, omurilik, pons ve tükrükbezinde; Pygm'nin ise göz lensi, kas, medula, dil, kalp ve ayaklardaekspresyona uğradıkları belirlendi. Daha sonra ekspresyon sonuçları internetortamına (www.genepaint.org) aktarıldı.2006, 77 sayfaAnahtar kelimeler: cDNA, gen ekspresyonu, İn situ hibridizasyoni

In this study, the gene expression analysis of some enzyme genes of glycogencatabolism that present in mouse genome was carried out using a automatic roboticsystem by in situ hybridization in tissue of mouse embryo (14,5 days). In this aim,specific primers were arranged for these enzyme genes (Agl, Pygb, Pygm). cDNAtemplates were prepared with these specific primers then antisense mRNAs (in vitrotranscription) was produced with specific cDNA templates.. In situ hybridization in whichwas used carried out antisense mRNAs tissue of mouse embryo (14,5days) wasmade. It was determined that Agl gene is expressed in muscle, lens, spinal cord,tongue, heart, choroids plexus, pones and frontal lobe, Pygm is expressed in brain,cranium, spinal cord, pones and salivary gland, Pygm is expressed in lens, muscle,medulla, tongue, heart and foot. Then, these results were transferred with software ininternet (www.genepaint.org).2006, 77 pagesKeywords: cDNA, gene expression, In situ hybridizationii