Kabak çekirdeğinden (Cucurbitae peponis semen) ve fındıktan (Corylus avellana) paraoksonaz enziminin saflaştırılması ve bazı pestisitlerin etkisinin araştırılması

Abstract

Paraoksonaz; HDL ile ilişkili, öncelikli olarak LDL'yi oksidasyondan koruma gibi fizyolojik role sahip organofosfat parçalayıcı bir enzimdir. Bu çalışmada kabak çekirdeğinden ve fındıktan paraoksonaz enzimi saflaştırıldı ve karakterize edildi. Paraoksonaz enziminin saflaştırılmasında afinite kromatografisinden faydalanıldı. Kabak çekirdeğinden ve fındıktan saflaştırılan paraoksonaz enziminin saflığını kontrol etmek için SDS-PAGE elektroforezi uygulandı. Kabak çekirdeğinden saflaştırılan paraoksonaz enziminin molekül ağırlığı 12942 Da ve 20421 Da olarak belirlendi. Fındıktan saflaştırılan paraoksonaz enziminin molekül ağırlığı ise 30892 Da olarak belirlendi. Enzimin optimum pH ve sıcaklık değerleri tespit edilerek paraokson ve fenilasetat substratları için Km ve Vmax değerleri belirlendi. Kabak çekirdeği ile ilgili çalışmada, paraokson substratı için Km ve Vmax değerleri 3,475 mM ve 2,935 µmol/ L.dak; fenil asetat substratı için 3,067 mM and 2,647 µmol/ L.dak olarak hesaplandı. Fındık ile ilgili çalışmada, paraokson substratı için Km ve Vmax değerleri 3,210 mM and 1,995 µmol/ L.dak; fenil asetat substratı için 2,732 mM and 2,413 µmol/ L.dak olarak hesaplandı. Enzim aktivitesi üzerine Mg2+, Ca2+, Cu2+, Mn2+, Zn2+, Fe2+ ve Fe3+ katyonlarının, EDTA, askorbik asit, ß-merkaptoetanol ve SDS bileşiklerinin, metil paratiyon, dimetoat, diklorvos, diazinon, metamidofos, etil paratiyon, fention ve asetamiprid pestisitlerinin etkisi araştırıldı.

Paraoxonase is a high-density lipoprotein (HDL)-associated enzyme which can hydrolyze organophosphates and protect LDL against oxidation. In this study; the paraoxonase enzyme was purified and characterized from the cucurbita seeds and hazelnut. Affinity chromatography was used for purification of the paraoxonase. SDS-polyacrylamide gel electrophoresis was applied for control of the paraoxonase enzyme purified from the cucurbita seeds and hazelnut. Molecular weight of the paraoxonase enzyme purified from cucurbitae seeds was determined as 12942 Da and 20421 Da. Molecular weight of the paraoxonase enzyme purified from hazelnut was determined as 30892 Da. Km and Vmax values for paraoxon and phenyl acetate substrates were determined after setting optimal pH and temperature conditions of paraoxonase enzyme. In the study with cucurbitae seeds, Km and Vmax values for paraoxon were calculated as 3,475mM and 2,935µmol/ L.dak; for phenyl acetate substrates were calculated as 3,067 mM and 2,647µmol/ L.dak. In the study with hazelnut, KM and Vmax values for paraoxon were calculated as 3,210 mM and 1,995 µmol/ L.dak; for phenyl acetate substrates were calculated as 2,732 mM and 2,413µmol/ L.dak. Effects of Mg2+, Ca2+, Cu2+, Mn2+, Zn2+, Fe2+, Fe3+cations; EDTA, ascorbic asid, ß-merkaptoethanol, SDS compounds and methyl-parathion, dichlorvos, dimethoate, diazinon, methamidophos, ethyl-parathion, fenthion and acetamiprid pesticides were researched on enzyme activity.