Alfa-1-proteinaz inhibitorü ve alfa-2-makroglobulinin proteinaz inhibisyonundaki rolü

Abstract

V. ÖZET aı -Proteinaz inhibitörü (oq-PI) ve a2-makroglobulin (012-M) insan plazmasına kansan proteazların denetiminden sorumlu iki plazma proteinidir. Saf oq -PI veya ct2-M ile elde edilen bulguların iki protein karışım halindeyken de geçerli olup olmadığı, hedef proteinaz olarak sığır pankreas tripsini kullanılarak araştırıldı. cq-Prnin triptik aktiviteyi tümüyle giderdiği bulundu. o-Me enterne tripsinin esteratik aktivitesi serbest tripsine göre %12 daha yüksekti, inhibitor karışımlarıyla yapılan deneylerde, karışım halindeki oq-PI'nin, saf cq-PI'ye göre daha yüksek aktivite gösterdiği; alternatif olarak o^-Min karışım halindeki aktivitesi beklenenden düşük olduğu görüldü: oq-PI ve 0C2-M karışımları ile yapılan titrasyonlardan hesaplanan tripsinle birleşme hız sabitleri oranı (k]y[/kpj=10+1.5) literatürden çıkarılan orandan (kM/kpı=30) farklıydı. aj-Pfnin redoks durumunun inhibitor aktiviteye etkisi araştırıldı: Okside (%0 SH içeren) ve redükte (%60 SH içeren) oq-PI ile hazırlanan cq -PI/a2-M karışımlarla titrasyon deneyleri tekrarlandı. Gözlenen hız sabiti oranı ve paylaşım yüzdelerinin aj-PI'nin yapısına duyarlılığı incelendi. Okside cq-PI ile yapılan titrasyonlarla plazma titrasyonuna benzer sonuçlar alındı; kjyj/kpi oranı literatürde verilenden düşüktü. Buna karşılık redükte aj-PI-tripsin titrasyonlarında gözlenen kj^/kpj1 nın beklenenden yüksek olduğu bulundu. Farklılığın k^g değerindeki bir değişiklikten kaynaklanabileceği düşünüldü. Bu olasılığı değerlendirmek üzere hedef proteinaz olarak tripsin kullanılarak, inhibitörün iki redoks durumu ile ilgili assosiyasyon hız sabitleri saptandı. cq-PI'nin sülfidril grubu içeriğinin inhibisyon tipini etkilemediği görüldü. Okside ve redükte aj-PI için kass değerleri benzer (^=2.710.3x105 M`lsn~l) ve literatürle uyumluydu. Sonuçlar, cq-PI ve a2-M arasında bir moleküler etkileşim olabileceğini düşündürdü. Anahtar Sözcükler: a 1 -proteinaz inhibitörü, a2-makroglobulin, proteaz inhibisyonu, protein-protein etkileşimleri

VI. ABSTRACT a i -Proteinase inhibitor (cq-PI) and a2-macroglobulin (cc2-M) are two plasma proteins responsible for the control of proteases of tissue origin. The question of whether or not data acquired with purified cq-PI and CC2-M in isolation are applicable to their mixtures has been examined, using bovine pancreatic trypsin as the target proteinase. Tryptic activity was inhibited totally by cq-PI. Entrapment in 0C2-M increased esteratic activity by 12%. Experiments done using mixtures of inhibitors showed that cq-PI was more effective in mixtures than in isolation; alternatively, ct2-M had inferior activity in mixed protein populations: Titrations of trypsin with mixtures of cq-PI and ct2-M showed that the effective ratio of rate constants for the association of enzyme with the two inhibitors (khj/kpr=10±1.5) was different from that inferred from the individual second-order rate constants (k^) reported earlier (k]yi/kpi=30). The effect of the redox state of cq-PI on inhibitory activity was examined: The titrations were repeated using mixtures of 0C2-M with oxidized and reduced cq-PI (0% and 60% SH content, respectively). The results obtained with mixtures containing oxidized cq-PI were similar to those obtained with plasma, and kj^/kpi was lower than the literature value. In contrast, kj^j/kpj observed in mixtures with reduced cq-PI was higher than expected. This suggested that k^ for cq-PI might be different for the two forms of the inhibitor. To check this possibility, k^ values for different redox forms of cq-PI were determined. The SH content of cq-PI did not change the type of inhibition. Oxidized and reduced cq-PI yielded k^ values (kass=2.7± 0.3x10^ M`lsec`l) which were similar and did not differ from the value reported in literature. The results suggested that cq-PI and ct2-M might interact with each other. Keywords: cq-proteinase inhibitor, a2-macroglobulin, proteinase inhibition, protein- protein interactions 45