Kromozomların solid boyanması sırasında görülen `G bandı benzeri yapılar`ın araştırılması

Abstract

G-bandları, kromozomların akromatik bölümlerinde kromozomum bir ucundan diğerine uzanan, enine yerleşimli koyu ve açık bandlar sistemidir. G-bandlama, rutin kromozom bandlamasmda en fazla kullanılan teknik haline gelmiştir. Günümüzde G-bandlama yapmak için çok değişik yöntemler kullanılmaktadır. Bu yöntemler bu gün hâlâ stadardize edilememiştir. Çünkü bandlama olayım, uygulandığı ortamın ısısı, nemi, boyanın pH'sı gibi çok çeşitli faktörler etkilemektedir. Bu çalışmada, literatürde bilinen herhangi bir bandlama işlemi uygulanmadığı halde, solid boyama sırasında görüldüğü için `spontan band` adım verdiğimiz G bandı benzeri yapıların oluşumunu etkileyen84 faktörler araştırıldı. Böylece hem halen tartışmalı olan G-bandlama mekanizmasını açıklayıcı ip uçları elde etmek, hem de uygulanması daha kolay ve standart olan bir yöntem geliştirmek amaçlandı. Araştırma genel olarak preparat hazırlanmasından önce ve sonra olmak üzere iki bölümde uygulandı. Toplam 36 paramatre çalışıldı. Preparat hazırlanmasından önce yapılan uygulamalardan, besi yerine eklenen FCS ve heparin oranının, kolşisinle birlikte distile su ekleyip çıkarımdan sonra fiksasyon ve serum fizyolojikle yıkama yapılmasının, çıkarımdan sonra uygulanan hipotonik konsantrasyonunun spontan band oluşumu üzerine etkili olduğu tespit edildi. Preparat hazırlanmasından sonraki uygulamalardan ise, ortamın nem derecesinin, fiksaüf kompozisyonundan değişikliklerin, kullanılan boya pH'sının, 2-merkaptoetanol ve hidrojen peroksit muamelesinin ve bazı alanlarda kendiliğinden görülen daha kırmızı boyanmanın, spontan band oluşumunu etkiledikleri belirlendi. Gelecekte spontan band üzerine etkili olan faktörlerin daha detaylı bir şekilde çalışılması da planlandı.

G bands are a system of dark and light bands which are horizontally localized from one end to other on euchromatic regions of chromosomes. G-banding has become the most widely used technique for the routine banding of chromosomes. Various protocols are known to be used in a number of laboratories. These protocols still are not standardized because banding process is affected by various factors such as environmental humidity, heat, and pH of the dye.86 In this study we have examined the causes of the occurrence of G band-like patterns that we called `spontaneous G-banding` as they are seen during the solid staining without any treatment known in the literature. Therefore, we aimed to get some clues about the known G-banding mechanism which is still controversial and also to develop a new, easy and standardized protocol for G-banding. This study was mainly organized in two parts, before and after preparation of the slides. A total of 36 parameters were studied. It has been determined that, of the treatment before preparation of slides, the proportions of PCS and heparin added into the medium, addition of distilled water with colchicine and fixation and washing with physiologic serum after harvesting, hypotonic concentration after harvesting are effective on the formation of spontaneous bands. Of the treatment after preparation of the slides, humidity of the environment, changes in fixative composition, pH of the dye, adding 2- mercaptoethanol and hydrogen peroxide and spontaneous dark red staining of the slides were observed as important factors in `spontaneous G-band` formation. We are now planning to undertake a more detailed study to review the other factors affecting `spontaneous G-banding` appearing during solid staining.