Oktopamin: Antioksidan kapasitesi ve insan karbonik anhidraz izoenzimleri (hCA I ve hCA II) üzerine etkisi

Abstract

Bu çalışmada oktopaminin antioksidan ve radikal giderme aktivitesi değerlendirildi. Ayrıca oktopaminin insan eritrosit karbonik anhidraz izoenzimi (hCA I ve hCA II) üzerine etkisi incelendi.Oktopaminin antioksidan ve radikal giderme aktivitesini değerlendirmek için ferrik tiyosiyanat metoduna göre 2,2´-azino-bis(3-etilbenztiyoazolin-6-sülfonik asit) radikal (ABTS?+) giderme aktivitesi, 1,1-difenil-2-pikril-hidrazil serbest radikal (DPPH?) giderme aktivitesi, N,N-dimetil-p-fenilendiamin radikal (DMPD?+) giderme aktivitesi, süperoksit anyon radikali (O2?-) giderme aktivitesi, potasyum ferriksiyanit indirgeme, Kuprak metodu ile kuprik iyonları (Cu2+) indirgeme ve FRAP metotları ile indirgeme kapasitesi ve bipiridil reaktifleri ile ferröz iyonları (Fe2+) şelatlama aktivitesi çalışıldı. Ayrıca ?-tokoferol ve onun suda çözünen bir analoğu olan troloks referans antioksidan olarak kullanıldı. Oktopamin kullanılan bütün metotlarda antioksidan ve radikal giderme aktivitesinin standartlara göre daha düşük olduğu gözlemlendi.Çalışmanın ikinci kısmında ise oktopaminin insan eritrosit karbonik anhidraz izoenzimi (hCA-I ve hCA-II) üzerine in vitro etkisi araştırıldı. Öncelikle hCA-I ve hCA-II izoenzimleri sırasıyla Sepharose-4B-L-Tirozin Sülfanilamit afinite kolon kromatografisi ile sırasıyla %23,9, %36,5 verimle 113 ve 478,4 kat saflaştırıldı. Enzim saflığını belirlemek için, sodyum dodesil sülfat-poliakrilamit jel elektroforezi (SDS-PAGE) yapıldı ve tek bant gözlendi. Yapılan çalışmalarda oktopaminin hCA I ve hCA II'yi aktivite ettiği gözlendi. Bu amaçla oktopaminin hCA I ve hCA II üzerine aktivasyon etkileri 4-nitrofenil asetat substratı ile esteraz aktivite metodu kullanılarak araştırıldı.

In this study, antioxidant and radical scavenging activities of octopamine were evaluated. Also, the effects of octopamine on human erythrocyte isoenzymes (hCA I and hCA II) were determined.In order to evaluate the antioxidant and radical scavenging activities of octopamine, different in vitro methods such as 2,2´-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid) radical (ABTS?+) scavenging activity, 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl free radical (DPPH?) scavenging activity, N,N-dimethyl-p-phenylenediamine radical (DMPD?+) scavenging activity, superoxide anion radical (O2?-) scavenging activity, reducing power by potassium ferricyanide reduction method, cupric ion (Cu2+) reduction capacity by Cuprac method, hydrogen peroxide scavenging activity and ferrous ions (Fe2+) chelating activities using by bipyridyl reagent were performed separately. Also, ?-tocopherol and trolox, a water-soluble analogue of ?-tocopherol, were used as the reference antioxidant compounds. Octopamine exhibited weaker antioxidant and radical scavenging effects in all of the used methods.In the second part of this study, the in vitro effects activity of octopamine on erythrocyte carbonic anhydrase isoenzymes (hCA-I and hCA-II) were investigated. Firstly, hCA-I and hCA-II were purified by Sepharose-4B-L-Tyrozine Sülfanilamid affinity column chromatography with yields of 23,9 and 36.5% and 113.0 and 478,4 fold purifications of each isoenzyme, respectively. For determination of enzyme purity, sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) was performed and single band was observed. Then, it was observed that octopamine had activity effects hCA I and hCA II. For this purpose, the activity effects of octopamine on hCA I, and hCA II were investigated by using the esterase assay, with 4-nitrophenyl acetate as substrate