Sinefrin ve fenilefrin: Antioksidan kapasitelerinin belirlenmesi ve insan karbonik anhidraz izoenzimleri (hCA I ve hCA II) ile asetilkolin esteraz enzimi üzerine etkilerinin araştırılması

Abstract

Çalışmamızda Sinefrin ve Fenilefrin'in insan eritrosit karbonik anhidraz izoenzimi I ve II (hCA I ve hCA II) üzerine in vitro etkileri araştırıldı. Öncelikle hCA I ve hCA II izoenzimleri sırasıyla Sepharose-4B-L-Tirozin afinite kolon kromatografisi ile saflaştırıldı. Enzim saflığını belirlemek için, SDS-PAGE yapıldı ve tek bant gözlendi. Ardından IC50 değerlerini bulmak için, hidrataz aktivitesi kullanılarak Sinefrin ve Fenilefrin'in hCA I ve hCA II üzerine inhibisyon etkileri araştırıldı. Ayrıca Sinefrin ve Fenilefrin'in hCA I ve hCA II üzerine inhibisyon etkileri esteraz aktivite metodu ile araştırıldı ve her bir madde için IC50 ve Ki değerleri hesaplandı. Çalışmamızın devamında Sinefrin ve Fenilefrin'in antioksidan kapasitesini değerlendirmek için, Fe+3 indirgeme kapasitesi, kuprak metodu ile kuprik iyonları (Cu+2) indirgeme kapasitesi, FRAP metodu ile indirgeme kapasitesi, 1,1-difenil-2-pikril-hidrazil serbest radikal (DPPH·) giderme, 2,2´-azino-bis(3-etilbenztiyoazolin-6-sülfonik asit) radikal (ABTS∙+) giderme,N,N-dimetil-pfenilendiamin radikal (DMPD+) giderme aktiviteleri, süperoksit anyon radikali (O2∙-) giderme, ferrozin ve bipiridil reaktifleri ile ferröz iyonları (Fe+2) şelatlama aktiviteleri ve son olarak ferrik tiyosiyanat metodu göre total antioksidan aktivitesi çalışıldı. Çalışmalar sırasında BHA, BHT,α-tokoferol, troloks standart antioksidan olarak kullanıldı ve kıyaslamalar bu dört standart madde ile karşılaştırılarak yapıldı. Çalışmamızın son kısmında ise Sinefrin ve Fenilefrin'in AChE'nin üzerine inhibisyon özelliği araştırıldı. İnhibisyon çalışmaları Ellman metoduna göre yapıldı. Her bir madde için IC50 ve Ki değerleri hesaplandı. Sırasıyla Sinefrin ve Fenilefrin için IC50 değerleri 0.226, 0.302 µM iken, Ki değerleri 0.169, 0.088 µM olarak hesaplandı. İnhibisyon türü ise yarışmalı inhibisyon olarak belirlendi.Anahtar Kelimeler: Antioksidan aktivite, Sinefrin, Fenilefrin, Karbonik anhidraz; Asetilkolinesteraz

In our study, the in vitro effects of Synephrine and Phenylephrine on erythrocyte carbonic anhydrase isoenzymes (hCA I and hCA II) were investigated. Firstly, hCA-I and hCA-II were purified by Sepharose-4B-L-Thyrosine affinity column chromatography. For determination of the enzyme purity, electrophoresis SDS-PAGE was performed and single band was observed for each isoenzymes. Then, for determination of IC50 values, the inhibitory of Synephrine and Phenyleprine were investigated hCA I, and hCA II isozymes by using hidratase assay. For this purpose esterase activity was used and IC50 and Ki values were calculated for each substance. In further work, antioxidant capacity of Synephrine and Phenylephrine was determined using the following methods; Fe+3 -Fe+2 reducing capacity, cupric ion (Cu+2) reduction capacity by CUPRAC method, reducing capacity by FRAP method, 2,2´-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid) radical (ABTS•+) scavenging, 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl free radical (DPPH·) scavenging and N,N-dimethyl-p-phenylenediamine radical (DMPD•+) scavenging activities, superoxide anion radical (O2•-) scavenging, ferrous ions (Fe+2) chelating activities using by ferrozine and bipyridyl reagents and lastly total antioxidant activity by ferric thiocyanate method were performed separately and during study, BHA, BHT, α-tocopherol and Trolox were used as the reference antioxidant compounds. Comparisons were performed with the four standard substances. In the last part of this study, it was investigated the effects ofSynephrine and Phenylephrine on AChE. The inhibition studies were performed according to by the Ellman method. IC50 and Ki values for were calculated for both substances. IC50 values werefound 0.226, 0.302 μM while Ki values was found as 0.169, 0.088 μM for Synephrine and Phenylephrine, respectively. The inhibition type was determined as the competitive.Keywords: Antioxidant activity, Synephrine; Phenylephrine; Carbonic anhydrase; Acetylcholine esterase