Capoeta capoeta umbla ve Capoeta trutta`nın solungaç, karaciğer, böbrek dokularından glukoz 6-fosfat dehidrogenaz ile glutatyon redüktaz enzimlerinin saflaştırılması ve bazı metallerin enzim aktivitesi üzerine etkilerinin incelenmesi

Abstract

Bu çalışmada, Capoeta capoeta umbla ve Capoeta trutta böbrek, karaciğer ve solungaç dokularından metabolizma için oldukça önemli olan glukoz 6-fosfat dehidrogenaz (D-glukoz-6-fosfat: NADP+ oksidoredüktaz, EC 1.1.1.49; G6PD) ve glutatyon redüktaz (Glutatyon: NADP+, oksidoredüktaz, EC 1.8.1.7.; GR) enzimleri ilk kez saflaştırıldı. Saflaştırma işlemleri, homojenatın hazırlanması, amonyum sülfat çöktürmesi ve 2',5'-ADP Sepharose 4B afinite kromatografisi yöntemleri ile gerçekleştirildi. Capoeta capoeta umbla böbrek, karaciğer ve solungaç dokularından G6PD enzimi sırasıyla %22,7, %19,28, %23,15 verimle ve 402,14, 3353,19, 736,5 kat; Capoeta trutta böbrek, karaciğer ve solungaç dokularından G6PD enzimi sırasıyla %20,38, %31,15, %34,43 verimle ve 576,65, 568,27, 803,9 kat; Capoeta capoeta umbla böbrek, karaciğer ve solungaç dokularından GR enzimi sırasıyla %23,09, %17,24, %48,74 verimle ve 389,18, 925,11, 1166,98 kat; Capoeta trutta böbrek, karaciğer ve solungaç dokularından GR enzimi sırasıyla %35,4, %21,07, %38,8 verimle ve 794, 734,86, 910,05 kat saflaştırıldı. Enzimlerin saflığı SDS-PAGE ile kontrol edildi. Ayrıca in vitro olarak bazı metallerin (Cu+2, Zn+2, Ni+2, Cd+2, Ag+, Pb+2, Fe+3, Co+2) saflaştırılan enzim aktiviteleri üzerine etkileri incelenerek inhibisyon gösteren metaller için IC50 ve Ki değerleri hesaplandı. Sonuçta, Ag+ iyonunun tüm balık dokularında enzim aktiviteleri üzerine en etkili inhibisyonu gösterdiği belirlendi.

In this study, glucose 6-phosphate dehydrogenase (D-glucose-6-phosphate: NADP+ oksidoreductase, EC 1.1.1.49; G6PD) and glutathione reductase (glutathione: NADP+, oksidoreductase, EC 1.8.1.7.; GR) enzymes which are of great importance for the metabolism were purified from kidney, liver and gill tissues of Capoeta capoeta umbla and Capoeta trutta for the first time. The purification was performed by preparation of homogenates, ammonium sulphate precipitation and 2',5'-ADP Sepharose 4B afinity chromatography. Capoeta capoeta umbla kidney, liver and gill G6PD enzymes were purified 402.14, 3353.19, 736.5 fold in a yield of 22.7%, 19.28%, 23.15%, respectively. Capoeta trutta kidney, liver and gill G6PD enzymes were purified 576.65, 568.27, 803.9 fold in a yield of 20.38%, 31.15%, 34.43%, respectively. Capoeta capoeta umbla kidney, liver and gill GR enzymes were purified 389.18, 925.11, 1166.98 fold in a yield of 23.09%, 17.24%, 48.74%, respectively. Capoeta trutta kidney, liver and gill GR enzymes were purified 794, 734.86, 910.05 fold in a yield of 35.4%, 21.07%, 38.8%, respectively. The purify of the enzymes were checked by SDS-PAGE. In addition, the effects of some metals (Cu2+, Zn2+, Ni2+, Cd2+, Ag+, Pb2+, Fe3+, Co2+) on enzymes from all tissues were investigated in vitro. IC50 and Ki values were calculated for these metals which showed inhibition effects. In conclusion, it was detected that Ag+ metal ion showed the most effective inhibition on enzyme activites on the all fish tissues.