Yaban mersini meyvesinden (Vaccinium arctostapylous L.) glutatyon s-transferaz enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu ve kinetik özelliklerinin incelenmesi

Abstract

Yaban mersini meyvesi (Vaccinium arctostapylous L.) antioksidan özelliğiyle bilinen ve özellikle halk hekimliğinde oldukça kullanılan bir meyvedir. Bu tezde yaban mersini meyvesinden Glutatyon S-transferaz enzimi (E.C. 2.5.1.18) saflaştırıldı. Saflaştırılma işlemi afinite ve jel filtrasyon kromatografileriyle ayrı ayrı yapıldı. Enziminin saflığı SDS-PAGE elektroforezi ile belirlendi. Enzim için karakterizasyon çalışmaları kapsamında K2HPO4 tamponunda optimum pH, optimum sıcaklık, optimum iyonik şiddet, stabil pH ile GSH ve 1-Klor-2,4-dinitrobenzen (CDNB) için KM ve Vmax çalışmaları yapıldı. Enzimin optimum pH'sı K2HPO4 tamponunda 7,2; optimum sıcaklığı 50°C, optimum iyonik şiddeti 1,0 M, stabil pH'sı K2HPO4 tamponunda 7,0; GSH ve CDNB için sırasıyla KM değeri 1,57 mM; 0,17 mM, Vmax değeri 0,048 EÜ/mL, 0,0159 EÜ/mL olarak bulundu. Buna ilaveten, enzim aktivitesi üzerine bazı metal iyonları; Cd2+, Ni2+, Cu2+, Mg2+, Ca2+, bazı pestisitler; diklorvos, asetamiprit, siyalotrin, haloksifop-p-metil, 2,4 diklorofenoksi asetikasit, sipermetrin, imidakloprit, fenoksiaprop-p-etil, glifosfat izopropilamin tuzu ve kimyasal bileşik olarak; kumarin, askorbik asit, sodyum sülfit, sodyum azid ve sitrik asit inhibisyon etkileri çalışıldı. Bu etken maddelerin IC50 değerleri belirlenip, Lineweaver Burk grafikleri çizilerek Ki değerleri ve inhibisyon türleri belirlendi.

Caucasian whortleberry (Vaccinium arctostapylous L.) is a plant, widely used in folk medicine and is well known for its antioxidant properties. In this thesis, Glutathione S-transferase (GST), was purified from the caucasian whortleberry. The purification of the enzyme was performed separately by affinity and gel filtration chromatography. The purity of the enzyme was determined by SDS-PAGE electrophoresis. Characterization studies were done for the enzyme. For this purpose, optimal pH, optimal temperature, optimum ionic strength, stable pH, KM ve Vmax values for GSH and CDNB were also determined for the enzyme as 7.2 in K2HPO4 buffer, 50°C, 1,0 M, 7,0 in K2HPO4 buffer, 1,57 mM; 0,17 mM and 0,048 EÜ/mL, 0,0159 EÜ/mL, respectively. Additionally, inhibitory effects of some metal ions; Cd2+, Ni2+, Cu2+, Mg2+, Ca2+, pesticides; dichlorvos, acetamiprid, cyhalothrin, haloxyfop-p-Methyl, 2,4 dichlorophenoxy acetic acid, cypermethrin, imidacloprid, fenoxaprop-p-ethyl, glyphosate isopropilamine salt and chemical compounds; coumarin, ascorbic acid, sodium sülphit, sodium azide and citric acid were examined. For these active substances IC50 values were calculating, Ki constants and inhibition types of these substances were determined from the Lineweaver-Burk graphs