Karayemiş meyvesinden (Prunus laurocerasus L.) glutatyon s-transferaz enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu ve kinetik özelliklerinin incelenmesi

Abstract

Karayemiş meyvesi (Prunus Laurocerasus L.) antioksidan özelliğiyle bilinen ve özellikle halk hekimliğinde çokça kullanılan bir meyvedir. Bu tezde karayemişin meyve etinden Glutatyon S- transferaz enzimi (E.C. 2.5.1.18) saflaştırıldı. Saflaştırılma işlemi afinite ve jel filtrasyon kromatografileriyle ayrı ayrı yapıldı. Enziminin saflığını kontrol etmek için SDS-PAGE elektroforezi uygulandı. Enzim için karakterizasyon çalışmaları olarak optimum pH, optimum sıcaklık, optimum iyonik şiddet, stabil pH ile GSH ve CDNB için KM ve Vmax çalışmaları yapıldı. Enzimin optimum pH' sı K-fosfat tamponunda 7,0; optimum sıcaklığı 30°C, optimum iyonik şiddeti 0,125 M, stabil pH'sı K-fosfat tamponunda 6,5; GSH ve CDNB için sırasıyla KM değeri 0,344 mM; 0,89 mM, Vmax değeri 0,098 EÜ/ml, 0,214 EÜ/ml olarak bulundu. Buna ilaveten, enzim aktivitesi üzerine bazı metal iyonların (Cd+2, Ni+2, Cu+2, Mg+2 ve Ca+2) ve pestisitlerin (Sodyum Dodesil Sülfat (SDS), Askorbik Asit (Vitamin C), Benzoik Asit ve Etilendiamin tetra asetik asit (EDTA) organik bileşik olarak, glifosat izopropilamin tuzu, fenoxaprop-p-etil, cypermethrin, dichlorvos, imidacloprid) inhibisyon etkileri çalışıldı Lineweaver–Burk grafiği metal iyonları ve pestisitler için çizilerek IC50 ve Ki değerleri hesaplanarak inhibisyon tipleri belirlendi.

The laurel fruit (Prunus Laurocerasus L.) is a plant, widely used in folk medicine and is well known for its antioxidant properties. In this thesis, Glutathione S-transferase (GST), one of well-known antioxidant enzyme, was purified from the laurel fruit flesh. The purification of the enzyme was performed separately by affinity and gel filtration chromatography. The purity of the enzyme was determined by SDS-PAGE electrophoresis. Characterization studies were done for the enzyme. For this purpose, optimal pH, optimal temperature, optimum ionic strength, stable pH, Km and Vmax values for GSH and CDNB were also determined for the enzyme as 7.0 in K-phosphate buffer, 30°C, 0.125 M, 6.5 in K-phosphate buffer, 0.344 mM, 0.89 mM, and 0.098 EU / ml, 0.214 EU / ml, respectively. Additionally, inhibitory effects of some metal ions (Cd2+, Ni2+, Cu2+, Mg2+, and Ca2+) and pesticides (Sodium dodecyl sulfate (SDS), Ascorbic acid (Vitamin C), Benzoic acid, and Ethylenediaminetetra acetic acid (EDTA) as an organic compounds; Glyphosate isopropylamine salt, Fenoxaprop-p-ethyl, Cypermethrin, Dichlorvos, and Imidacloprid) were examined the enzyme's activity in vitro by performing Lineweaver–Burk graphs and plotting activity%. IC50 and Ki values were calculated for each of metal ions and pesticides.