Dehidroaskorbat redüktaz enziminin petroselinum crispum yapraklarından saflaştırılarak, enzimatik ve moleküler özelliklerinin incelenmesi

Abstract

IV ÖZET Askorbik asit, dokularda hızla yükseltgenen bir bileşik tir. Hücrelerde, askorbik asiti indirgenmiş durumda tu tan iki enzimatik sistem vardır. Bu enzimlerden biri, nikotinamid adenin dinükleotid fosfat bağımlıdır. Diğeri ise, araştırmamıza konu olan, glutatyon bağımlı dehidro- askorbat redüktaz enzimidir. Dehidroaskorbat redüktaz, bütün canlılarda bulunan, tek bir polipeptid zincirinden oluşmuş bir tiyol enzimdir. Bu çalışmada, dehidroaskorbat redüktaz enzimi Petroseli- num çrispum (maydanoz) bitkisinin olgun yapraklarından elde edilmiştir. Enzim, amonyum sülfat-diyaliz ve Sepha- dex G-100 j el elemesi teknikleri kullanılarak 135.8 kez saflaştırılraıştır. Enzimin dayanıklılığı ve kinetik özel likleri incelenmiştir. Enzimin dehidroaskorbat ve glutat yon için Km değerleri 0.12 mM ve 8.3 mM olarak saptanmış tır. Enzimin alt birim molekül ağırlığı, sodyum dodesil sülfat poliakrilamid jel elektroforezi ile 24.000 dalton olarak bulunmuştur. Enzim için bir çalışma mekanizması önerilmiştir.

SUMMARY Ascorbic acid is rapidly oxidized in tissues. There are two enzymatic systems in the cells that keep ascorbic acid in the reduced state. One of these enzymes is nicotinamide adenine dinucleotide phosphate dependent, the other is glutathione dependent dehydroascorbate reductase, which is the enzyme used in this study. Dehydroascorbate reductase is a thiol enzyme composed of one polypeptide chain and found in all living organisms. In this study, dehydroascorbate reductase is isolated from the leaves of Petroselinum crispum (parsley). The enzyme is purified 135*8 fold by using ammonium sulphate fractionation, dialysis and Sephadex G-100 gel exclusion chromatography techniques. The stability and kinetic properties of the enzyme have been investigated. The X values of the enzyme for dehydroascorbate and glutathione have been found to be 0.12` nM and 8.3 ml respectively. The subunit molecular weight of the enzyme have been found to be 24.000 daltons by sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis. A mechanism of action for dehydroascorbate reductase have been proposed.