Aspergillus nigerin poligalakturonaz sentezine etki eden fizyolojik parametrelerin saptanması ve enzimin bazı kinetik özelliklerinin incelenmesi

Abstract

11 ÖZET Bu çalışmada, yeryüzünde geniş bir yayılım alanı gösteren k&peAgiZZıxA nigZA.1 in hücre dışı karakterli pektik enzimlerinden poligalakturonaz enziminin sentezini arttırmak amacıyla bazı atık ve artıkların kulla nılması, farklı karbon ve azot kaynaklarının uygun derişimleri; üre tim sıcaklığı, üretim pH' sı ve üretim şekli gibi fizyolojik paramet reler, incelenmiş ve Sephadex G-200 kolon kromatograf isi ile kısmen saflaştırılan poligalakturonaz enziminin bazı kinetik özellikleri saptanmıştır. K&peJvgiZZuA nigeA., serbest karboksil grubu taşıyan poligalakturonik asitin % 2.0 gm derişimini içeren pH'sı 5.0 ve üretim sıcaklığı 30 *C olan Czapek Dox kültür ortamında maksimum poligalakturonaz aktivitesi göstermiştir. Ayrıca, atık ve artıklardan kayısı ve şeftali posala rının (1.6 ve 2.4 mg./ml.), şlempenin (2.3 mg./ml.) ve melasın (0.75 mg./ml.) glukoz eşdeğeri şeker (G.E.Ş.) içeren örneklerinde maksimum enzim aktivitesi saptanmıştır. Azot kaynaklarından NH.H-PO, ve (NH,)`S0,'ın % 0.5 gm derişiminin enzim sentezini arttırdığı gözlen miştir. fapeAgil&ui nigeA poligalakturonazı Sephadex G-200 kolonu kullanıla rak % 21 verimle 11.38 kez saflaştırılmıştır. Saflaştırılan enzimle yapılan kinetik çalışmalar sonucunda, substrat olarak poligalakturo nik asit kullanıldığında Michaelis-Menten sabitesi (Km) 0.50 mg./ml. değerinde bulunmuştur. Enzimin substrat doymuşluk eğrisinin parabo lik olduğu ve poligalakturonik asite karşı yüksek derecede özgüllük gösterdiği saptanmıştır. Maksimum enzim aktivitesi pH: 5.0 ve sıcak lığın 30`C olduğu enzim substrat karışımında gözlenmiştir. Ayrıca, ++ ++ * 4**4* ++ Ca, Cu, Hg ve Ba gibi iyonların enzim aktivitesini baskıla- + +.+... dığı ve Na, K, Lı gibi iyonların da enzim aktıvıtesmi sıtımüle ettiği gözlenmiştir.

Ill SUMMARY In this study polygalacturonase, one of the pectic enzymes of A&peA- gittüA nigzh. was investigated. A. nigQA is a widely distributed or ganism in nature. In order to increase the synthesis of the enzyme effect of remnants, suitable concentrations of different nitrogen and carbon compounds, temperatures and pH were studied. Polygalacturona se was partially purified by Sephadex G-200 colon chromatography and its kinetics was studied. A&p&Agi&tuA nigeA showed maximum polygalacturonase activity in Czapec Dox growth medium containing 2.0 % polygalacturonic acid at 30 `C and pH: 5.0. Also maximum enzyme activity was established in glucose like sugar containing samples of posa of apricot and peach (1.6 and 2.4 mg./ ml.) şlempe (2.3 mg./ml.) and molases (0.75 mg./ml.). It was established that nitrogen sources 0.5 % NH.ILPO, and (NH,)`S0, increased the enzyme synthesis. Polygalacturonase of A&p2A.giZZut> nigeA was purified 11.38 times with 21 % productivity by using Sephadex G-200 colon. Kinetics of purified enzyme was studied by using polygalacturonic acid as a substrate. Michaelis-Menten constant was found as Km 0.50 mg./ml. Enzyme was found highly spesific to polygalacturonic acid. It was found that substrate saturation curve of the enzyme was parabolic. Maximum enzyme activity was established in enzyme-substrate mixture at 30'C and pH: 5.0. Also, it was found that Ca, Cu, Hg and Ba ions supressed the + + + enzyme activity and Na, K, Li ions stimulated the enzyme activity.