Salmonella typhimurium TA97, TA98 ve TA100 suşlarından timin mutantlarının izolasyonu ve bu mutasyonun kimyasalların mutajenik teşhisinde kullanılması

Abstract

11 ÖZET Bu çalışmanın amacı, Salmonella suşlanndan TA97, TA98 ve TAlOO'de timin mutasyonu oluşturmak ve bazı kimyasallar ile pestisitleri kullanarak timin mutasyonunun mutasyon sıklığını saptamaktır. Timin'e gereksinimi olan suşları elde etmek için, petri kabı vasatında trimethoprim seleksi- yonu kullanıldı. Gecelik kültürden alman 0,1 ml'lik bakteri hücreleri 50 pg/ml timin ve 10 ug/ml trimethoprim içeren minimal glukoz agar vasatlarına yayılarak ekildi. îki günlük inkübasyondan sonra oluşan tek koloniler aynı tip vasatlara ekilerek saflaştınldı. Sonra, bu koloniler timin içermeyen minimal glukoz agar vasatlarında timin gereksinimi için test edildi. Sadece revertant oluşturmayan veya çok düşük reversi- yon sıklığı gösteren mutantlar ilerki çalışmalarımız için muhafaza edildi. Timin'e gereksinimi olan TA97, TA98, TA 100 suşları, TA97T`, TA98T` ve TA100T` olarak kodlandı. Bazı kimyasalların ve pestisidlerin mutajenik etkileri, sadece histidin geninde değil, timin geninde de test edildi. Kimyasallar (2 Aminofloren, Sodyum Azid, Nitrosoguanidin) ve pestisidle rin (Tri fluralin, Azinphos Metil, Bioresmethrin, Tetromethrin) timin mutasyonuna bağlı olarak TA97T`, TA98T-, TA100T` suşlarında TA97, TA98 ve TA100 suşlanna nazaran daha düşük mutajenik etki gösterdiği gözlendi. Çünkü, timin yokluğuna bağlı bakteri ölümünde, büyümekte olan nükleotid zincirinde boşluklar (gaps) oluşur ve bu boşlukların bazıla rının UV onarımına benzer yolla onarıldığı düşünülür. Bu nedenle, UV'ye ve timin gereksinimine karşı verilen cevabın benzer olduğuna inanılır.

HI SUMMARY The aim of this research is to form thymine mutation out of the Salmo nella strains of TA97, TA98 and TA100 and determine the mutation frequency for this marker by using some chemicals and pesticides. A plate method has been used to obtain thymine requiring strains by trimethoprim selection. 0.1 ml allquots of an overnight culture were spread on to glucose minimal plates containing 50 yg/ml thymine and 10 ug/ml trimethoprim. After two days of incubation single colonies were picked and purified on the same type of plates. Then these colonies were tested for the thymine requirement on glucose minimal plates containing no thymine. Only non reverting mutant or those with very low reversion rates were retained for subsequent use. Thymine requiring strains of TA97, TA98, and TA100 coded as TA97T`, TA98T` and TA100T` Mutagenic effects of some chemicals and pesticides are tested not only in histidin but also in thymine markers. It was shown that chemicals (2 Aminofloren, sodyum Azid, Nitrosoguani- din) and pesticides (Tri f luralin, Azinphos Metil, Bioresmethrin, Tetrameth- rin) have lower mutagenic effect in TA97T-, TA98T-, TA100T` than TA97, TA98 and 100, presumably due to thymine mutation. Because in thyminless death single strand gaps occur in the growing nucleotide chain, some of which are repaired probably in a similar manner to UV damage. Therefore, one would expect that the responses to UV irradiation and thymine starvation would be similar.