Candida utilis C-468`den ürikaz eldesi ve bazı biyokimyasal özelliklerinin incelenmesi

Abstract

iv ÖZET İnsan ve pek çok memelide pürin metabolizmasının son ürünü ürik asittir. ürikaz, ürik asidi allantoin ve hidrojen pe rokside oksitler. Bu özelliğinden dolayı ürikaz enzimi kli nikte kan ve idrardaki ürik asit miktarının tayininde kul lanılır. Son yıllarda gerek endüstriyel, gerekse tıbbi alandaki enzimatik çalışmalarda, mikrobiyal kaynaklı enzim ler tercih edilmektedir. Bu çalışmada Candida utilis C-46S'in üretimi ve peroksizom larda lokalize olmuş hücre içi karakterli ürikaz enziminin optimum koşulları saptandı. Bu amaçla üretim ve indüksiyon ortamı başlangıç pH'ları, sıcaklıkları, farklı karbon kaynakları, indüksiyon ortamın daki ürik asit derişimi, üretim şekli, indüksiyon süresi, enzim-substrat karış ımındaki ürik asit derişimi ve ön inkü basyonun etkisi gibi parametreler incelendi. Candida utilis C-46S ürikazmın maksimum üretimi için üre tim ortamı pH'sı 6.2, indüksiyon ortamı pH'sı 7.2 ve opti mum sıcaklık 30 *C olarak saptandı. En yüksek enzim aktivi tesi glukoz içeren üretim ve indüksiyon ortamlarından alı nan örneklerde gözlendi. İndüksiyon ortamındaki ürik asit derişimi % 0.03 gr, indük siyon süresi 3 saat ve çalkantılı üretim şekli uygulandığın da, maksimum ürikaz aktivitesi (0.540 U/ml) ölçüldü. Enzim-substrat karışımındaki ürik asit derişimi 50 jjgr/3.2ml olduğunda ve 5 dakika 30*Cde ön inkübasyona bırakıldığında, enzim aktivitesinin arttığı saptandı. Yüksek ürik asit de rişiminin ise enzim aktivitesini engellediği gözlendi.

V SUMMARY Uric acid is the final product or purine metabolism in most mammals including human beings. Uric acid is oxidized to allantoin and hydrogen peroxide by the uricase enzyme activity. Because of this property uricase has become a useful tool in clinical laboratories for the quantitavive analysis of uric acid in blood and urine specimens. In recent years microbial enzymes are prefered for industrial and clinical enzymatic studies. In this present study, the optimal conditions of the intra cellular uricase enzyme of Candida utiti* C-468 which is localized in peroxisomes and the growth of the yeast have been studied. It was found that for the maximum production of uricase by Candida utiZİA C-468, the pH degrees of the culture and induction media should be adjusted to 6.2 and 7.2 respectively. It was also found that the optimum incubation temperature should be 30 `C for both media. The maximum enzyme activity was detected in samples collected from glucose containing culture and induction media. The enzyme activity was comparatively high (0.540 Unit/ml) when the induction was carried out for 3 hours with aeration, in 0.03 gr % uric acid containing medium. Increase in uricase activity was established in 50 pgr/3.2 ml uric acid containing enzyme-substrate mixture which was pre- incubated 5 minutes at 30 `C. On the other hand, the enzyme activity was inhibited when uric acid concentration was higher than 50 jugr/3.2 ml.