Bazı katekolaminlerin, sabit dalgaboyu-senkronize fluoresons kopik yöntemle tayini

Abstract

Ill ÖZET Sunulan çalışma, çeşitli hastalıkların teşhis ve tedavisinde önemli rol oynayan katekolamin grubundan; epinefrin, norepinefrin ve dopaminin senkronize fluoresans spektroskopi yöntemiyle tayinini amaçlamıştır. Çalışmanın ilk bölümünde epinefrin, norepinefrin ve dopamin standart çözeltilerinin uyarılma ve emisyon (fluoresans) spektrumlan ahnmıştır. Uyarılma dalgaboyu farklı değerlerde sabit tutularak alman çok sayıda spektrumlardan, üç boyutlu spektral davranışları ve kontur haritaları çizilmiş, uygun dalgaboyu farkları saptanarak senkronize spektrumlan alınmış ve bu bileşiklerin bağıl miktarlarının senkronize fluoresans yöntemle hesaplanıp hesaplanamayacağı araştırılmıştır. Çalışmanın ikinci bölümünde, norepinefrin ve epinefrinin trihidroksi indol (THI) türevleri ve dopaminin dihidroksi indol (DHI) türevi hazırlanmış, ilk bölümdeki çalışmalar tekrarlanarak senkronize fluori- metrik yöntemin nicel analizdeki başarısı sınanmıştır. Yükseltgenme ürünlerinin senkronize yöntemle ayrılabilmeleri için en uygun dalgaboyu farkları Dopamin (DHI) için AA, = 50 nm, Norepinefrin ve Epinefrin (THI) için AA. = 210 nm ve AA. = 100 nm seçilmiştir. Senkronize fluoresans yöntemle kanşımlardaki dopamin miktarı hesaplanabilirken diğer iki analat piklerinin çakışması nedeniyle iyi ve doğru bir ayırım sağlanamamış ancak farklı bir yaklaşımla toplam ve bağıl miktarları hesaplanmıştır. Çalışmanın üçüncü bölümünde her üç bileşik için kalibrasyon çalışma ları yapılmıştır. Kalibrasyon çalışmaları yükseltgeme öncesi ve yükselt genme sonrası olmak üzere iki kısımda yürütülmüştür.Kendi hazırladı ğımız katekolamin karışımlarından elde edilen sonuçlar ve analizin terarlanabilirliği, hassasiyeti ve bağıl hataları hesaplanmıştır. Tez sürecinin son kısmını doku analiz çalışmaları oluşturmaktadır. Bu bölümde önce doku analizi yapabilmek için optimum şartlar belirlenmiş ve daha sonra farmakoloji bölümünden temin edilen farklı fare doku kesitlerinden analiz çalışmaları yapılmıştır.

IV SUMMARY The study presented here, aims the quantitative analysis of certain important members of cathecholamine group of compounds; namely dopamine, norepinephrine and epinephrine which play an important role in diagnosis and treatment of various diseases, using synchronous spectrofluorimetry. In the first part of this study, excitation and emmision (fluorescence) spectra of the standart solutions of dopamine, norepinephrine and epinephrine were recorded. Using all different spectral data with different and constant excitation wavelenght, three-dimensional total lumi nescence spectra of each analyte and contour map were drawn, the most suitable wavelenth differences were found, synchronous fluorescence spectra of mixtures were recorded and the relative amounts of each were checked wheather they could be accurately calculated or not. In the second part of the study, trihydroxyindole (THI) derivatives of epinephrine and norepinephrine and dihydroxyindole (DHI) derivative of dopamine were prepared, similar works as in part one were repeated and the success of derivatizations were confirmed by synchronous fluore scence spectra. The optimum wavelenth differences for the best determi nations were selected from these synchronous works as ; for Dopamine (DHI) AX=50 nm; for epinephrine and norepinephrine (THI) AX = 210 nm and AX = 100 nm. Although accurate and precise values were found for dopamine in the mixtures, for the other two analytes, this was not the case because of the band overlap but still with new approachs it was possible to find the total and relative amounts of epinephrine and norepinephrine. In the third part of the study, the calibration works were carried out for the oxidized and nonoxidized forms of cathecholamines ; precision of the method, sensitivity and accurancy of the analysis were determined using various standart mixtures of analytes. In the final part, determination of analytes were repeated in real tissue samples. Primarely the extraction and isolation methods of cathechol amines were done to obtain maxsimum recovery, latter the mouse tissues that were obtained from the pharmacology department,were analysed