Olivetolʼun antioksidan kapasitesinin belirlenmesi ve bazı metabolik enzimler üzerinde inhibisyon etkilerinin incelenmesi

Abstract

Bu çalışmada fenolik bir madde olan Olivetol'un, asetilkolinesteraz (AChE), bütirilkolinesteraz (BChE), α-glikozidaz, α-amilaz, glutatyon S-transferaz (GST) ve glutatyon redüktaz (GR) enzimleri ile insan eritrosit karbonik anhidraz I ve II izoenzimleri (hCA I ve II) üzerine in vitro inhibisyon etkileri araştırıldı. Öncelikle hCA I ve II izoenzimleri Sefarose-4B-L-Tirozin afinite kolon kromatografisi tekniği ile sırasıyla 273,11; 734,93 kat ve %26,75; %15,74 verimle saflaştırıldı. GST ve GR enzimleri ise sırasıyla Glutatyon agaroz ve 2',5'-ADP-Sefarose-4B-Afinite kromatografisi teknikleri ile 176,30; 185,0 kat ve %40,45; %16,31 verimle saflaştırıldı. Enzimlerin saflığını belirlemek için sodyumdodesil sülfat poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) yapıldı ve her bir enzim için tek bant gözlendi. Sonrasında Olivetol'un hCA I ve hCA II, GST, GR, AChE, BChE, α-glikozidaz ve α-amilaz üzerine inhibisyon etkileri araştırıldı. Olivetolün her bir enzim için %50 inhibisyona sebep olan konsantrasyonu (IC50) sırasıyla 90,87 nM; 118,66 nM; 9,90 μM; 77,02 μM; 5,13 nM; 6,01 nM; 45,47 nM; 204,24 nM olarak hesaplandı. İnhibisyon sabitleri (Ki) ise 88,05±11,15 nM; 178,27±35,94 nM; 6,02±1,15 μM; 97±22,77 μM; 3,40±0,34 nM; 2,73±0,18 nM; 41,85±9,38 nM olarak bulundu. Çalışmanın son kısmında Olivetol'un antioksidan ve radikal giderme kapasitesini değerlendirmek için, ferröz iyonları (Fe2+) indirgeme, kuprik iyonları (Cu2+) indirgeme, FRAP metoduna göre ferrik iyonları (Fe3+) indirgeme, 1,1-difenil-2-pikril-hidrazil serbest radikalini (DPPH·) giderme, 2,2´-azino-bis (3-etilbenztiyoazolin-6-sülfonik asit) radikalini (ABTS∙+) giderme, N,N-dimetil-p-fenilendiamin radikalini (DMPD∙+) giderme ve süperoksit anyon radikali (O2∙-) giderme ile metal şelatlama aktivitesi çalışıldı. Anahtar Kelimeler: Olivetol, Antioksidan aktivite, Karbonik Anhidraz, Glutatyon S-transferaz, Glutatyon Redüktaz, Asetilkolinesteraz, Bütirilkolinesteraz, α-Glikozidaz, α-Amilaz

In this study, in vitro inhibitory effect of olivetol against acetylcholinesterase (AChE), butyrylcholinesterase, α-glycosidase, α-amilase, glutathione S-transferase (GST) and glutathione reductase (GR), erythrocyte carbonic anhydrase isoenzymes I and II isoenzymes (hCA I and hCA II) was studied. Firstly, hCA I and II isoenzyms were purified by Sepharose-4B-L-Tyrosine affinity chromatography with 273.11 and 734.93 purification folds and %26.75 and %15.74 yields, respectively. Also, GST and GR enzymes were purified by Glutathione agarose and 2',5'-ADP-Sepharose-4B affinity chromatography techniques with 176.30, 185 purification folds and a yield of %40.45; %16,31, respectivelly. For purities of the enzymes, sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) was done and a single band observed for each enzyme. Then, IC50 and Ki values of hCA I, hCA II, GST, GR, AChE and BChE, α-glycosidase and α-amilase enzymes were calculated as 90.87 nM; 118.66 nM; 9.90 μM; 77.02 μM; 5.13 nM; 6.01 nM; 45.47 nM; 204.24 nM, respectively. At the same manner, Ki values were determined as 88.05±11.15 nM; 178.27±35.94 nM; 6.02±1.15 μM; 97±22.77 μM; 3.40±0.34 nM; 2.73±0.18 nM; 41.85±9.38, respectively. In the last part of this study, for evaluation of antioxidant and radical scavenging capacity of olivetol, ferrous ions (Fe2+) reducing capacity, cupric ions (Cu2+) reduction capacity by Cuprac method, FRAP reducing capacity, DPPH free radical scavenging, ABTS radical scavenging, DMPD radical scavenging, superoxide anion radical (O2•⎻) scavenging and, metal chelating activities were performed. Keywords: Olivetol, Antioxidant activity, Carbonic Anhydrase, Glutathione S-transferase, Glutathione Reductase, Acetylcholineesterase, Butyrylcholinesterase, α-Glycosidase, α-Amilase