Arılardaki protozoon parazitlerin belirlenmesinde moleküler tekniklerin optimizasyonu

Abstract

Son yıllarda ekosistem bütünlüğü ve gıda güvencesi açısından pollinatörlerin önemi sürekli artmaktadır. Bu önemlerine karşılık, çeşitli parazit ve patojenlerin etkisiyle polinatörler güç kaybına uğramakta ve sayıları her geçen gün azalmaktadır. Polinatörlerdeki bu parazitlerin hızlı ve kesin bir şekilde tespit edilmesi amacıyla yapılan bu çalışmada, moleküler olarak tanımlanan (Meeus vd., 2010) iki önemli yaban arısı paraziti olan Crithidia bombi ve Apicystis bombi'nin tespiti için moleküler yöntemler geliştirildi. Cytb, GAPDH ve ITS genleri için primerler dizayn edildi. Crithidia bombi için Cytb-Leis (5'-GGTGTAGGTTTTAGTTTAGG-3'/5'-CTACAATAAACAAATCATAATATATATACAATT-3') ve GAPDH-741 (5'-CCGAGTACTTCGCGTACCAG-3'/5'-CGAGGATGCCCTTCATGT-3') primerlerin geçerliliği başka arı türlerinde test edildi ve %75 duyarlılığa sahip olduğu hesaplandı. Apicystis bombi için 18SFa/28R1100a (TTACGTCCCTGCCCTTTGTA- TCGGAGGGAACCAGCTACTA) primer çiftinin geçerliliği kabul edildi ve %90 duyarlılığa sahip olduğu hesaplandı. Sonraki çalışmalar beli bir coğrafik bölgede belli bir türün genetik orijini ortaya çıkarabilir ve bu parazitin yerel veya yaban arıların ticari taşınmasından dolayı meydana gelen patojen dağılımından olup olmadığını kanıtlayabilir.Ayrıca, soliter arılarda bir protozoon parazit araştırmasında Osmia cornuta'yı enfekte eden yeni bir tripanosom bulundu. Muhtemelen soliter arılar, Apicystis bombi parazitini bir araç olarak kullanmaktadır.

The importance of pollinators for ecosystem integrity and food security has been repeatedly increased in recent years. In response to this importance, pollinators decrease numbers with effect of different parasites and pathogens day by day. With the object of fast and crisply detecting of this parasites in pollinators, molecular tools were developed for detecting two important bumblebee parasites Crithidia bombi and Apicytis bombi, which were recently molecularly identified (Meeus vd., 2010). Primers were designed for Cytb, GAPDH, ITS which enable us in the genome of A. bombi and C. bombi. For C.bombi , validation of this primers Cytb-Leis (5'-GGTGTAGGTTTTAGTTTAGG-3'/5'-CTACAATAAACAAATCATAATATATATACAATT-3') and GAPDH-741 (5'-CCGAGTACTTCGCGTACCAG-3'/5'-CGAGGATGCCCTTCATGT-3') were tested and calculated 75% sensitivity. For A.bombi, validation of 18SFa/28R1100a (5'-TTACGTCCCTGCCCTTTGTA-3'/5'-TCGGAGGGAACCAGCTACTA-3') was accepted and calculated 90% sensitivity. Later studies can derive the genetic origin of a certain species in a certain geographic region and prove if this parasite was native or recently spilled over because of commercial transport of bumblebees.Also, an exploratory survey of protozoan parasites in solitary bees revealed a new trypanosome infecting Osmia cornuta and probably that solitary bees could function as a reservoir species for Apicystis bombi.