Klinik ve subklinik gumboro vakalarından virus izolasyonu ve serotiplendirilmesi

Abstract

VI. ÖZET Türkiye'de 1992-1993 yıllan arasında görülen Gumboro salgınında Bornova Veteriner Kontrol ve Araştırma Enstitüsü Tavuk Hastalıkları Teşhis Laboratuvarına teşhis amacıyla intikal eden vakalardan 89 adedi araştırmaya uygun bulundu. Klinik ve otopsi bulgularına göre broyler orijinli 70 vakanın 26'sı akut, 44'ü subklinik Gumboro şüphesi ile incelendi yumurtacı 19 vakadan 7'si akut, diğer 12'si ise subklinik Gumboro olarak incelendi. Klinik ve subklinik vakalardan alınan bursa Fabriciuslardan 2-3 embiryo pasajı yapıldı. Seksen dokuz izolattan 21'i (% 23.6) embiryoda ölüm yapmadı. Enfekte embiryolardan alman CAM'lar AGP testinde % 88, 7 Reovirus % 86, 5 Adenoviruslarla karışık bulundu. Enfekte CAM'ların supernetant sıvılarının, CEF hücre kültüründeki pasajında % 64'ü IBDV için özel CPE oluşturduğu tesbit edildi, izolasyonların % 69.64'ü subklinik, % 54.54'i klinik vakalardan yapıldı. Enfekte hücre kültürlerinin supernetant sıvılarının HA aktivite kontrolünde 89 izolatttan 32'nin pozitif olduğu, fakat HA aktiviteleri pozitif olan 32 izolattan 22'sinin Lasota antiserumu ile pozitif HI oluşturduğu müşahade edildi. Subklinik vakalardan izole edilen izolatların 13'û, klinik vakalardan izole edilen izolatlann 7'si 7'şer adet deneme pilicine verildi. On gün gözlem altında tutulan enfekte piliçlerin canlı kalanları kesilerek serumları alındı. Serumların AGP testinde Seroüp l (D78 ve E Varyant) ve 2 (OH) antijenleri üe serotiplendirmeleri yapıldı. Subklinik vakalardan ayrılan 2 izolat ile enfekte edilen piliçlerin serumları E varyant antijeni ile pozitif presiüpitasyon oluştururken diğer izolatlar ile enfekte piliçlerin serumları D78 antijeni ile pozitif presipitasyon oluşturdu. Serumların tamamı serotip 2'ye karşı negatif bulundu. Elektronmikroskobik incelemede Intra Bursal Enfeksiyondan 48 saat sonra, IBDV'ünün, bursa Fabricius'ta enfekte hücrelerin sitoplazması içinde hekzogonal yapıda bazı alanlarda düzgün sıralar halinde paketlendiği ve paketlerin çevresinde herhangi bir zar olmadığı tesbit edildi. 57

VII. SUMMARY Izolation arı-d Idcntifîcation to Flcld Straln of CHnical and Subclinical Gumboro Diseases in Ihis study, 89 cases were chosen for investigation amogn the suspected materials that had been brought to Bornova Veteriner Control and Reserche Enstitute for diagnosis from the Gumboro disease outbreaks in 1992-1993 in Turkey. According to the clinical symptoms and postmortem findings, 26 out of 70 cascs originating from broilers shovved acute clinical disease signs and 44 of them showcd subciinical infection. Out of 19 cases in egg type pullets, 7 cases were diagnosed with acute clinical disease and other 12 cases with subciinical infection. The bursa Fabricius (BF) materials whlch were collected from the clinical and subciinical disease cases, were inoculated into embriyonated SPF eggs ancl passaged 2-3 times. Out of 89 Jsolateds 21 (23.6 %) did not cause any embriyo mortality. The chorioallantoic membranes (CAM) of the infected embriyos were tested by ağar gel precipitation test (AGP) and found to be positive 88.7 % for Reovirus, and 86.7 % for Adenovirus infections. When the supernatant of the infected CAM's were inoculated into the chicken embriyo fibroblast cells (CEF), 64 % of the isolates produced cytopathic effect (CPE) specific for IBDV. Of these isolations, 67.7 % were made from subciinical cases and 54.4 % from clinical cases. The results of hemaglutinating activity (HA), control of infected tissue culture supernatanls shovved that 32 out of 89 isolates were HA posiüve and 22 of the 32 MA posiüve isolates /vere inhibited with antisera to Lasota strain by hemaglutination inhibition (Hl) test. Thirteen isolates from the subciinical, and 7 isolates from the clinical cases vvere inoculated into experimental (4 /veeks ages) chickens. They were observed for symptoms for 10 days and later the survivors were bled ancl the sera vvere collected. Thesc antisera vvere tested against to the serotype-'l (O78 and E variant) and serotype 2 (OH) antigens by AGP test. Sera of the chickens that are infected vvîth 58two isolates belonging to subclinical cases producing precipitation lines with E variant antigen while other sera of the chickens infected with other isolates, produced precipitation lines with D78 antigen. All of the isolates were found to react negatively with serotype 2 antigen. Electronmicroscopic examination was performed on the tissues which were fixed after 48 hours Intra Bursal infections. Numerous particles frequently with a hexagonal outline, were always found free in cytosol. 59