Oligospermide sperme ait yapısal parametrelerin araştırılması

Abstract

DSÖ (Dünya Sağlık Örgütü)'nün son raporlarına göre: son yıllarda erkeklerde sperm sayısı giderek azalmaktadır. Günümüzde gittikçe artan erkeğe bağlı infertilitenin en önemli nedenlerinden birisi de sperm sayısının normalden az olması yani oligospermidir. Oligospermiye bağlı infertilitede sperme bağlı bazı hücresel yapısal elemanlar (aktin, tübülin) ve yine hücre içinde yer alan organellere ilişkin (mitokondria ve akrozom/lizozom) verilerin daha detaylı analizi ile bu tabloya neden olan nedenlerin daha iyi anlaşılmasına katkıda bulunmak amaçlanmıştır.Selçuk Üniversitesi Tıp Fakültesi Hastanesi androloji laboratuarı ile Özel Selçuklu Hastanesi Tüp Bebek Ünitesi'ne başvuran 20 oligospermik, 20 normospermik hastaların spermiyogramları yapıldıktan sonra biyo-atık olarak kalan semen numuneleri çalışmaya dahil edildi. Hastaların en az üç günlük cinsel perhiz sonrası alınan semenleri değerlendirmeye alındı. Alınan spermlerin sayısal ve yapısal analiz sonuçları kaydedildi. İlaveten yapısal parametrelerden aktin ve tübülin gibi hücre iskeleti elemanları ile lizozom ve mitokondrium gibi organelllere ilişkin spesifik çeşitli fluoresan işaretlemeler yapıldı. Bu amaçla: canlı mitokondri ve lizozom işaretleyicileri (MitoTracker red FM ve LysoTracker Green FM) kullanıldı. Doğrudan taze semen örneği 50nM konsantrasyonda her iki boyayla 37oC'de 45 dakika inkübe edildi ve daha sonra fluoresan mikroskopla incelendi. Aktin ve tübülin için semen yayma preparatları kullanıldı. Aseton-formaldehit ile fiske edilen preparatlar falloidin paclitaxel ile fluoresan mikroskopide değerlendirildi. Anti-tübülin antikoru ile indirekt immunofluoresan işaretleme yapılarak fluoresan mikroskopide değerlendirildi. Tüm değerlendirmeler WHO 2010 kriterleri esas alınarak yapıldı.Yapılan incelemeler sonucunda oligospermik ve normospermik hasta gruplarının arasında anlamlı fark gözlendi (P<0.05).

According to last reports of WHO (World Health Organisation), number of spermatozoon in men has been decreasing for last years. One of the most important reasons of gradually increasing infertility connected to men is lacking number of spermatozoon, in other words oligospermia. It is aimed at contributing to be understood reasons which cause this fact by detailed analysis of some cellular structural components (actin, tubulin) connected to spermatozoon in infertility caused by oligospermia and details about organelles (mitochondria and acrosome/lysosome) located within the cell. After being done spermiyograms of 20 oligospermic and 20 normospermic patients applied to andrology laboratuary of Hospital of Selcuk University Faculty of Medicine and test-tube baby unit of Özel Selcuklu Hospital, remaining bio-additives semen samples were included in study. Semens, taken from patients after least 3 days sexual abstinence, were evaluated. Numerical and structural Analysis results of taken spermatozoon were saved. Additionally spesific various fluorescent markings were made on cytoskeletal elements such as actin and tubulin from structural parameters and organelles such as lysosome and mitochondria. For this reason live mitochondria ve lysosome markers (MitoTracker red-FM and LysoTracker Green-FM) were used. Direct fresh semen samples were incubated in 50nM concentration with to paints at 37°C for 45 minutes and later were examined with fluorescent microscope. Spreading preparats were used for actin and tübülin. Preparats fixed by acetone formaldehyde were assessed in fluorescent microscope with paclitaxel. Making indirect immunofluorescence marking with anti tubulin antibody, it is assessed in fluorescent microscope. All assesments were performed according to WHO 2010 criteria. As a result of examinations, significant differences were observed between the patient groups' oligospermic and normospermic. (P<0.05).