Tavuk embriyosu gastroşizis modelinde nitrik oksit sentaz inhibisyonunun intestinal hasara etkisi

Abstract

6. ÖZET Gastroşiziste nitrik oksit sentaz (NOS) aktivitesinin artmış olduğu gösterilmiş ve intestinal hasardan sorumlu olabileceği iddia edilmiştir. Bu çalışmada, tavuk embriyosu gastroşizis modelinde, NOS inhibisyonunun intestinal hasara etkisinin morfolojik olarak incelenmesi amaçlandı. NOS inhibitörü olarak deksametazon ve L-NAME kullanıldı. Standart şartlarda inkübe edilmiş, 16 günlük döllenmiş tavuk yumurtalarından, herbirinde 30 yumurta bulunan toplam 9 çalışma grubu oluşturuldu ve 3 kategoriye ayrıldı. Normal (N) gruba hiç bir işlem yapılmadı. Şem (Ş) grubunda, amniotik ve allantoik membranlar açılarak, insandaki amniotik kaviteye benzetildi. Gastroşizis (G) grubunda, kann duvarında bir defekt oluşturularak barsak ansları karın dışına çıkarıldı. Deksametazon (D) ve L-NAME (L) gruplarında, şem işleminden hemen sonra, D grubuna 0.2 ug/g/gün deksametazon, L grubuna 10 ug/g/gün L-NAME başlandı ve dört gün boyunca devam edildi. Deksametazon + gastroşizis (DG) ve L-NAME + gastroşizis (LG) gruplarında, gastroşizis oluşturulduktan hemen sonra, D ve L gruplarındaki doz ve sürede deksametazon ve L-NAME uygulandı. Gastroşizis + deksametazon (GD) ve gastroşizis + L-NAME (GL) gruplarında ise gastroşizis oluşturulduktan 2 gün sonra, aynı dozlarda deksametazon ve L-NAME başlandı ve son iki gün boyunca devam edildi. N, Ş, D, L ve G gruplarından oluşan model kategorisinde, şem işleminin, gastroşizisin ve uygulanan ilaçların mortaliteye ve embriyonik gelişim düzeyine etkileri araştırıldı. D, G, DG ve GD gruplarından oluşan ikinci kategoride deksametazonun; L, G, LG ve GL gruplarından oluşan üçüncü kategoride ise L-NAME nin gastroşizisteki intestinal hasara etkileri araştırıldı. Yirminci günün sonunda yumurtalar yeniden açılarak, grupların sağkalım oranlan ve canlı embriyoların gelişim düzeyleri hesaplandı; barsaklardaki morfolojik değişiklikler makroskopik ve mikroskopik olarak değerlendirildi. Sağkalım oranlan N grubunda %100, şem işlemi yapılmış gruplarda %56.6 - %60.0, gastroşizis yapılmış gruplarda %36.6 - %43.3 bulundu. G, GD ve GL gruplannda daha fazla olmak üzere, cerrahi işlem yapılmış tüm gruplarda gelişme geriliği saptandı. Barsaklann makroskopik görünümü şem işlemi yapılmış gruplarda normal bulunurken, G, GD ve GL gruplarında barsaklarda kısalma, kalınlaşma ve anslar arasında yoğun fibrinöz yapışıklıklar saptandı. DG ve LG gruplarında ise hafif derecede kalınlaşma dışında 32değişiklik saptanmadı. Mifcroskopik incelemelerde, DG ve LG gruplarında, G grubu îte karşılaştırıldığında, serozada daha belirgin olmak üzere, barsak duvar kalınlığında anlamlı bîr azalma ve normal etelerlere, yaklaşma okluğu bulundu, ?îJ3 ve GL gruplarında ise serozal kalınlığın ve barsak duvar kalınlığının, G grubundan farklı olmadığı saplandı. Sonuç olarak denilebilir ki, intestinal hasar oluşmadan önce uygulanan deksametazon ve L-NAME ile NOS enziminin inhibe edilmesi, gastroşizisteki morfolojik değişikliklerin oluşmasını engeller, ancak intestinal hasar oluştuktan sonra geri döndürmez. 33

7.SUMMARY Effect Nitriconin tfae Chick Embryoof Gastroschisis it has shown that gastroschisis increases small bowel nitric oxide syuthase (NOS) activity which raay be responsible for intestinai damage. in the present study, in the chicfc embryoof gastroschisis, a raorphologic evaluation of the effect of NOS inhibition on inleslinalis aimed. Dexamethasone and L-NAME were used as NOS inhibitors. Sixteen-day-o!d fertilized chickwere incubated at standart conditîons and devided into Bine groups in thrce category, each group had 30 eggs. Mormai (N) oroup was incubated without any surgical procedure. in sham (S) group, the amnioallantoic membrane was opened to create a common cavity which resembles amniotic cavity in huraan. in gastroschisis (G) group, a defect in the abdominal «'ali was made and intestinai loops were exteriorized. in dexamethasone (D) and l,-NAME (L) groups, sham procedure was perforraed. At the same time, in group D, 0,2 ııg/g/d dexameıhasone and in group L, 10 i g/g/d L-NAME were administered, and continued for four days. Tn dexamethasone + gastroschisis (1X3) and L-NAME + sastroschisis (LG) groups, gastroscbisîs procedure was performed. Ât the same time either dexamethasone ör L-NAME /vere administered as in groups D and L. in gastroschisis + dexamethasone (GD) and gastroschisis.+ L-NAME (GL) groups, afler two days of the creation of gastroschisîs, either dexamethasone ör L-NAME were administered at the same doses, and continued for the last two days. in the model cateı>ory including N, S, D, L, and G groups, the effects of surgical proeedures and drugs on the mortality and embryonic development were dîscussed, in the second and third categories including D, O, DG, and GD groups and L, (i, LG, and GL groups, respectively, the eflects of dexamethasone and L-NAME on intestinai damage in t>astrosehisis were discussed. At the end of 20* day of incubation, surviva) rales and developmental levels of alîve embryos were calculated. intestinai morphological were investigaled macroscopically and microscopically. Survival rates were fouııd as fallows: 100% in N group, 56.6%-60.0% in shara procedure performed aroups, and 36,6%-43.3% in gastroschisîs procedure performed groups, in ali groups except N, especially in G, GD, and GL groups, there were developmental retardation. 34Macroscopic appearences of bowel loops were normal in sham procedure performed groups. Shortening, thickening, and fibrous adhesions were found in the exteriorized bowel of G, GD, and GL groups, but there were only mild thickening in DG and LG groups. Microscopically, bowel wall thickness, especially serosal thickness in groups DG and LG, were found significantly lower than those in group G. On the contrary, in groups GD and GL, bowel wall thickness and serosal thickness were found similar compared with group G. In conclusion, inhibition of NOS enzyme by dexamethasone or L-NAME prevents gastroschisis induced morphological changes if they are administered before the intestinal damage occured. 35