Malignansi tanısında periferik kan, hücre süspansiyonları ve solid dokularda flow sitometrik DNA ve hücre siklusu analizleri

Abstract

ÖZET Bu araştırmada; hematolojik malignansi ön tanılı hastaların kemik iliğinden, mesane kanseri ön tanılı hastaların idrar örneklerinden, lösemi ön tanılı hastaların kan örneklerinden, ayrıca tümör ön tanılı çeşitli dokuların taze, formolde fikse ve parafinli örneklerinden mekanik ve enzimatik (pepsinli) olarak, meme kanseri tanısı konmuş arşiv materyalinden de retrospektif çalışmalarla flow sitometrik DNA content (içerik) ve hücre siklusu analizleri yapılmıştır. Çalışmada çeşitli şartların metoda, varyasyon katsayısına (CV), aggregat ve debris oranına, S faz, S2/M ve DNA indekslerine etkileri araştırılmıştır. Periferik kan ve idrar numunelerinin varyasyon katsayısı kemik iliği numunelerinden daha küçük bulunmuştur. örneklerden 15.000 - 35.000 hücre sayılmış, aggregat ve debris oranları 7.1. 00' den küçük bulunmuştur. Solid dokularda enzimatik - mekanik gruplar arasında CV değerleri farklı bulunmuş, en küçük CV değeri taze enzimatik gruptan elde edilmiş, istatiksel olarak amlamlıdır. Tümörlerin DNA ploidisi tüm numunelerde aynı bulunmuştur. DNA indeksleri bütün gruplarda benzer çıkmış, diploidlerde hiç değişme olmazken, aneuploidlerde değişiklikler görülmüş, ancak taze numunelerde daha küçük değerler elde edilmiştir. Solid dokuların farklı gruplarında analiz edilen ortalama hücre sayısı 20.000 dir. S ve G2M fazlarında tüm gruplarda değişiklikler gözlenmiş istatiksel olarak anlamlı bulunmamıştır. Retrospektif parafinli meme örneklerinden enzimatik çalışma ile daha hassas sonuçlar elde edilmiştir. Elde ettiğimiz verilerden yola çıkarak flow sitometrik DNA ve hücre siklusu analizi tüm dokulardan yapılabilir, ancak tek hücre süspansiyonlarında, taze solid dokularda enzimatik olarak daha hassas sonuçlar sağlanır. Anahtar Kelimeler: Flow sitometri, DNA içeriği, DNA indeksi, S- faz, proliferatif indeks, taze, formolde fikse, parafinli doku örnekleri, tek hücre süspansiyonları, enzimatik-mekanik çalışma

SUMMARY In this study, the flow cytometric DNA content and cell cycle analysis technique was used on the bone marrow, urine, and blood samples which are taken from 30 human tumors. Also, this technique was applied by the using of mechanic and enzymatic (pepsin) method, on the fresh, formalin fixed, and paraffin embedded samples which are taken from the same part of 10 human tumors. In addition, 10 archive materials were used same technique. In the study, the effecs of the different condition on the method, coefficient of variation (CV), rate of aggregation and debris, S-phase, G2M» and DNA indices were investigated. The coefficient of variation values of peripheral blood and urine samples were less than bone marrow. Between enzymatic and mechanic groups the CV values were different at the solid tumors. The small CV values were obtained from the fresh enzymatic group. This is istatically meaningful (P<0.01). The DNA ploidy of the tumors was the same in all types of samples. The DNA indices (DIs) measured from either formalin fixed and paraffin embedded tissues correlated strongly with those obtained from fresh tissue al tough they tended to be somewhat smaller inte fresh enzymatic samples. The S-phase fractions measured from all types of samples were of the same order of magnitude in most cases. The retrospective enzymatic group mare sensitive than other group. It is concluded that all types samples are suitable for the determination of DNA ploidy, DI, and S-phase fraction, but at the cell suspensions and fresh enzymatic solid tissues it gives more sensitive results. Key terms: Flow cytometry, DNA content, DNA index, S-phase fraction, proliferative index, fresh, formalin fixed, and paraffin embedded tissue.