Konjenital Adrenal Hiperplazi hastalarında 21-hidroksilaz gen mutasyonlarının araştırılması

Abstract

21-hidroksilaz (21OH) defektine bağlı Konjenital Adrenal Hiperplazi (21OHD KAH) en sık görülen kalıtsal metabolik hastalıklardan biridir. 21OH geni (CYP21A2) 6. kromozomun kısa koluna yerleşik (6p21.3) 10 ekzondan oluşmuş bir gendir. Bugüne kadar CYP21A2 geni üzerinde 130'un üzerinde çok çeşitli mutasyonlar gösterilmiştir. Ancak, bu mutasyonların yaklaşık %95'ini büyük delesyon/konversiyon, 11 sıkça görülen nokta mutasyonu, küçük delesyon ve insersiyonlar oluşturmaktadır.Bizim araştırmamız kapsamında 28'i tuz kaybettirici, 8'i basit virilizan ve 3'ü de non-klasik tip olmak üzere toplam 39 21OHD KAH hastası çalışıldı. Delesyon/konversiyonlar long-PCR/Restriksiyon Enzimi Parça Uzunluk Polimorfizmi (RFLP) ve southern-blot ile, 11 nokta mutasyonu da PCR/Amplifikasyonun Yarattığı Enzim Kesim Bölgeleri (ACRS) analizi ile çalışıldı. Bu yöntemlerle mutasyon gösterilemeyen hastalar da DNA dizi analizi ile çalışıldı.Araştırmamızda tespit ettiğimiz en sık görülen mutasyonlar; %35,13 ile intron 2'deki c.293-13C/A>G, %16,21 ile translasyon başlama kodonunu tutan c.2T>C, %16,20 ile delesyon/konversiyon ve %14,86 ile p.Q319X mutasyonlarıdır.İlk kez bu çalışmada yeni bir kurucu mutasyon (c.2T>C), iki yeni CYP21A1P/CYP21A2 kimerik geni ve referans SNP'te yer almayan ve patolojik etkisi bilinmeyen iki yeni nükleotid değişimi (c.202+42DelG, c.293?104DelG) tespit edildi.Çalışmamızın sonuçları bölgemizin 21OHD KAH hastalığındaki kendine özgü mutasyon profilini göstermekte ve klinik olarak teşhis ve tedaviye ışık tutmaktadır.Anahtar Kelimeler: Konjenital Adrenal Hiperplazi, 21-hidroksilaz, CYP21A2, kurucu mutasyon, c.2T>C, CYP21A1P/CYP21A2 kimerik geni

Investigation of 21-Hydroxylase Gene Mutations in Patients with Congenital Adrenal HyperplasiaCongenital adrenal hyperplasia (CAH) caused by 21-hydroxylase deficiency (21OHD CAH) is one of the most common inherited metabolic disorder. 21OH gene (CYP21A2), which consists of ten exons, is located on the short arm of chromosome 6 (6p21.3). To date, over 130 very different kinds of mutations have been shown on CYP21A2 gene. However, large deletions/conversions, 11 frequent point mutations and small deletions/insertions constitute 95 percent of these mutations.A total of 39 21OHD CAH patients which constitute of 28 salt-wasting (SW), 8 simple-virilizing (SV) and 3 non-classics (NC) were studied in our investigation. Large deletions/conversions were analyzed with long-PCR/Restriction fragment length polymorphism (RFLP) and southern-blotting, 11 frequent point mutations and small deletions/insertions were analyzed with PCR/Amplification-created restriction sites (ACRS) methods. Mutations of patients which can not be detected by these methods were analyzed by using DNA sequencing method.The most common mutations identified in our study are c.293-13C/A>G on intron 2 with %35,13, novel founder mutation c.2T>C with %16,21, deletions/conversions with %16,2 and p.Q319X with %14,86.For the first time, a novel founder mutation (c.2T>C), two novel CYP21A1P/CYP21A2 chimeric genes and two nucleotide substation with an unknown pathological effect on intron 1 and 2 of CYP21A2 gene (c.202+42DelG, c.293?110DelG) that not reported in the reference Single Nucleotide Polymorphism (rsSNP) were found in this study .The results of this study elucidate distinctive mutation profile of 21OHD CAH disease in our region and shed light on clinical diagnosis and treatment.Key Words: Congenital adrenal hyperplasia, 21-hydroxylase, CYP21A2, founder mutation, c.2T>C, CYP21A1P/CYP21A2 chimeric gene