Kafeik asit fenetil ester (CAPE)`in farklı kolorektal kanser hücre hatları üzerindeki apoptotik etkileri ve survivin ekspresyonundaki değişimler

Abstract

Günümüzde yaygın kanser türlerinden biri olan kolorektal kanserde, kemoterapötiklere karşı gelişen direnç ve kemoterapötiklerin sağlıklı hücreler için toksik olması bu kanserlerin tedavisinde karşılaşılan en önemli sorunların başında gelmektedir. Tezin amacı; kafeik asit fenetil ester (CAPE)'in, farklı kolorektal kanser hücre hatları üzerindeki apoptotik etkilerinin ve bir anti apoptotik protein olan survivin ekspresyonu üzerindeki etkilerinin incelenmesidir. Bu bağlamda; farklı kolorektal kanser hücre hatları ve normal kolorektal hücre hattı kullanılarak, CAPE'in hücreler üzerindeki anti tümöral etkileri araştırıldı. Bu amaçla, CAPE ile bir kemoterapötik ajan olan 5-Fluorourasil (5-FU), hücrelere ayrı ayrı ve birlikte muamele edilerek oluşturdukları etki hücre canlılık analizleri yapılarak incelendi. CAPE'in canlılığı doza bağlı olarak RKO, HCT-116 ve DLD-1 hücre hatlarında anlamlı oranlarda azalttığı gösterildi. Bununla birlikte; CAPE ve 5-FU'nun birlikte kullanılmasının, tek başlarına kullanılmalarına kıyasla hücre canlılıkları üzerinde anlamlı bir fark oluşturmadıkları gözlendi. CAPE muamelesinin hücre morfolojisi üzerinde oluşturduğu apoptoza özgü değişimler akridin oranj/etidyum bromür boyama tekniği kullanılarak tespit edildi. Flow sitometri çalışmaları ile CAPE muamelesinin; RKO, HCT-116 ve DLD-1 hücre hatlarında apoptotik hücre yüzdesini ve kaspaz-3 aktivasyonunu artırdığı gözlendi. Ayrıca bütün hücre hatlarında CAPE muamelesinin, survivin ekspresyonu ve p53 proteininin Ser-46 ve Ser-15 rezidüleri üzerinden fosforilasyonuna etkisi western blot yöntemiyle incelendi ve her hücre hattında farklı sonuçlar elde edildi. Survivinin mRNA düzeyindeki ekspresyon analizleri kantitatif real time PCR (qRT-PCR) ile araştırıldığında, CAPE'in yalnızca DLD-1 ve RKO hücre hatlarında ekspresyonu anlamlı derecede azalttığı gözlendi.

Colorectal cancer is one of the most common cancer type. The resistance to chemotherapeutics which are used in the treatment of colorectal cancer constitutes an obstacle for the treatment of the disease. These chemotherapeutics also have toxic effects on healthy cells. In this thesis, it was aimed to investigate the apoptotic effects of caffeic acid phenethyl ester (CAPE) on different colorectal cancer cell lines and the alterations in the expression of anti apoptotic protein survivin. In this connection, it was analyzed the anti tumoral effects of CAPE on different colorectal cancer cell lines and healthy colorectal cancer line. Cell lines were treated with CAPE, a chemotherapeutic agent 5-fluorourasil (5-FU) and CAPE in combination with 5-FU. Their effects on different cell lines were invesitgated by cell viability tests. It was demonstrated that CAPE decreased cell viability of RKO, HCT-116 and DLD-1 cancer cell lines in a dose dependent manner. Morphological differences of cells after CAPE treatment were observed by acridine orange/ethidium bromide staining method. Apoptotic cell percentage and active caspase-3 alterations of the cells were observed by flow cytometric analysis. According to these analysis, CAPE increased apoptotic cell percentage and active caspase-3 level in RKO, HCT-116 and DLD-1 cell lines. The alterations of survivin, phospho p53-Ser46 and phospho p53-Ser15 protein levels were analyzed by western blot method. It was observed that CAPE caused different effects in survivin, phospho p53-Ser46 and phospho p53-Ser15 protein levels on different cell lines. The alterations of mRNA expression levels of survivin in different cell lines were analyzed by quantitative real time PCR method. It was shown that mRNA expression of survivin decreased in DLD-1 and RKO cell lines after CAPE treatment.