Fludarabin`in insan lökasitleri ve HL-60 hücrelerinin mikrobisid fonksiyonları üzerindeki etkileri

Abstract

IV ÖZET Doğan A. Fludarabin'in insan Iökositleri ve HL-60 hücrelerinin mikrobisid fonksiyonları üzerindeki etkileri. Hacettepe Üniversitesi Tıp Fakültesi, Biyokimya Tezi. Ankara, 2002 Fagositoz sırasında nötrofillerde oluşan hidrojen peroksit (H2O2), degranülasyon ile fagozom içine verilen myeloperoksidaz (MPO) enziminin substratlanndan biridir. MPO; H2O2 ve Cl` kullanarak, lökositlerdeki başlıcamikrobisid molekül olan hipokloröz asiti (HOCİ) oluşturur. Bu çalışmanın amacı, kronik lenfositer lösemi tedavisinde kullanılan Fudarabin'in lökositlerin mikrobisid fonksiyonlan üzerine etkilerini incelemektir. Bu amaçla, diferansiye HL-60 hücreleri ve izole insan Iökositleri Fludarabin ile inkübe edilip öncelikle ilacın doz-bağımlı sitotoksik etkisi ölçüldü, daha sonra ise fagositoz ve degranülasyon kapasiteleri ve MPO aktivitesi değerlendirildi. Fagositoz ve degranülasyon akım sitometrik yöntemle, hücrelerdeki MPO aktivitesi ise -biri sentetik bir substrat olan tetrametil benzidin'in MPO tarafından oksitlenmesine, diğeri ise MPO'ın doğal ürünü olan HOCl'in ölçülmesine dayanan- iki ayrı spektrofotometrik yöntemle ölçüldü. Fludarabin'in diferansiye HL- 60 hücreleri ve lökositlerde, diferansiye olmamış HL-60 hücreleri için gerekenden çok daha yüksek dozlarda sitotoksik etki gösterdiği görüldü. O nedenle tam olarak LD50 etkisine ulaşılmamış olsa da 500 ug/ml dozun üzerine çıkılmadı. Fagositoz deneyi tam kanın aksine kültüre konan hücrelerde anlamlı sonuç vermedi ve Fludarabin ile tedavi edilen hastaların kanından çalışılmasının daha anlamlı olacağı sonucuna varıldı. Degranülasyon fonksiyonu ve MPO aktivitesinde ise lökositlerde Fludarabin ile anlamlı bir artış olduğu, diferansiye HL-60 hücrelerinde ise bir değişiklik olmadığı görüldü. Sonuç olarak Fludarabin'in lökositlerin mikrobisid fonksiyonlarını olumsuz yönde etkilemediği düşünüldü. Anahtar sözcükler: Kemoterapi, fagositoz, degranülasyon, myeloperoksidaz Destekleyen Kuruluşlar: HÜTF, TÜBİTAK (SBAG-AYD-352)

ABSTRACT Doğan A. Effects of Fludarabine on the microbicidal functions of human leukocytes and HL-60 cells, Hacettepe University Faculty of Medicine, Thesis in Biochemistry, Ankara 2002 H2O2, produced in neutrophils during phagocytosis, is the substrate of the enzyme myeloperoxidase (MPO) which is released into the phagosome through degranulation. MPO produces hypochlorous acid (HOC1) by using H2O2 and CI` and this is the main oxygen-dependent microbicidal system in leukocytes. The aim of this study is to analyze the effect of Fludarabine (a drug used in treatment of chronic lymphocytic leukemia) on the microbicidal functions of neutrophils. We first measured the cytotoxic effect of the drug on differentiated HL-60 cells and isolated leukocytes. Later we evaluated the phagocytic capacity, degranulation capacity, and MPO activities of cells incubated with Fludarabine. Phagocytosis and degranulation were measured by flow cytometric methods. MPO activity was measured by two spectrophotometric methods, one is through the oxidation of the synthetic substrate tetramethyl benzidine by MPO, and the other is through measuring the amount of its natural product, HOC1. We found that when compared to nondifferentiated HL-60 cells, more elevated drug concentrations were necesary to obtain a cytotoxic effect in differentiated HL-60 cells or leukocytes. Therefore, we did not exceed 500 ug/ml even in case we could not obtain the LD50 dose. Phagocytosis test was not succesful in cultured cells and we concluded that it would be better to apply this test on the blood samples of patients treated with Fludarabine. In leukocytes, the drug increased degranulation function, MPO activity and HOC1 production, whereas there was no difference in degranulation function and MPO activity of differentiated HL-60 cells. We concluded that Fludarabine had no negative effect on the microbicidal functions of leukocytes. Keywords: Chemotherapy, phagocytosis, degranulation, myeloperoxidase. Supported by HÜTF, TÜBİTAK (SBAG-AYD-352)