M.phelei, M.smegmatis: Patojen olmayan mikrobakteri türlerinin antitümoral etkileri

Abstract

ÖZET Keskin, M. S., M. phlei, M. smegmatis: patojen olmayan mikobakteri türlerinin antitümoral etkileri, Hacettepe Üniversitesi Tıp Fakültesi, Üroloji Tezi. Ankara 2004. İnsan için patojen olmayan iki mikobakteri türünün, çeşitli biyokimyasal basamaklarla elde edilen ekstrelerinin, insan tam kanından elde edilen makrofajlar ile inkübasyonu sonucu ortaya çıkan İL- 12 ve TNF-a yanıtlarını ELISA yöntemi ile inceledik. Her iki tür için deneyler, 10 gram hücre ile yapıldı. Sonikasyon ile hücreler parçalandı. İlk santrifüj sonrası hücreler duvar içeriği ve sitozol olmak üzere iki kışıma ayrıldı. Sitozol örneği alındı ve kalan örnekten ethanol presipitasyonu ile DNA elde edildi. Duvar komponentlerinin olduğu örnek dahil olmak üzere bu örneği takip eden basamaklardan örnekler alındı. Bu örneğe SDS ile protein ekstraksiyonu onu takiben, aseton ile lipid ekstraksiyonu uygulandı. Elde edilen örneklerle yapılan deneyler sonucunda IL-12 ve TNF-a yanıtlan hücre duvar komponenti ve proteinlerin bol olarak bulunduğu örneklerde yüksekti. TNF-a yanıtı aynı deneylerde, aynı örnekler için EL-12 yanıtına göre belirgin bir düşüklük gösterdi. Bu örneklerle ortaya çıkan TNF-a yanıtı, IL-12 yanıtı ile karşılaştırıldığında, proteinden ve lipidden fakir örneklerde de görüldü. Her iki türün de aynı deneyler için aynı örneklerde birbiriyle karşılaştınlabilir IL-12 ve TNF-a yanıtlan mevcuttu. Bu bulgulara göre M.phlei ve M.smegmatis insan makrofajlanna immunstimülan etki göstermektedirler. Sonuç olarak BCG'ye göre daha az toksik olan bu ajanlar yüzeyel mesane tümörü tedavisinde birer alternatif olabilirler. Anahtar Kelimeler: Mikobakteri, hücre duvan, IL-12, TNF-a, KIS, M.phlei, M.smegmatis, immünoterapi Destekleyen Kuruluşlar: HÜTF 2003 G31

ABSTRACT Keskin, M. S., M. phlei, M. smegmatis: the antitumoral effects of non- pathogen mycobacteria species, Hacettepe University Faculty of Medicine Thesis in Urology, Ankara 2004. We evaluated IL-12 and TNF- a responses of the biochemical extracts of two Mycobacterium species which are non-pathogenic for humans, by ELISA, after incubation with macrophages derived from human complete blood. For both species 10 grams of cells are used in each experiment. The cells were disrupted by sonication. After the first centrifuge, the cells were separated into two parts one of which is composed of cell wall structures and the other is composed of cytosol. A specimen was collected from cytosol extract then from remaining sample, DNA was precipitated with ethanol. Including the cell wall specimen, samples were collected from consecutive steps. First protein extraction with SDS then lipid extraction with acetone is performed. As a result of the experiments which are carried out with these samples, the responses for IL-12 and TNF-a were high in the samples in which there were abundant cell wall components and proteins. The TNF-a response for the same samples in the same experiments were lower according to IL-12 responses. When compared with IL-12 response, the TNF-a response were also observed in the samples which contained less amount of proteins and lipids. Both species had comparable IL-12 and TNF-a results in the same experiments. According to these results, M.phlei and M.smegmatis have an immunstimulating on human macrophages. As a result, these microorganisms which are less toxic then BCG, maybe alternatives in the treatment of superficial bladder tumors. Keywords: Mycobacteria, cell wall, IL-12, TNF-a, CIS, M.phlei, M.smegmatis, immunotherapy Supported By: HUTF 2003 G31