İnflamasyonun eşlik ettiği miyopatilerde kas biyopsilerinde immünohistokimyasal yöntemlerle disferlin proteinin değerlendirilmesi

Abstract

ÖZET Mavioğlu A., İnflamasyonun eşlik ettiği miyopatilerde kas biyopsilerinde imminohistokimyasal yöntemlerle disferlin proteinin değerlendirilmesi, Hacettepe Üniversitesi Tıp Fakültesi, Nöroloji Tezi. Ankara, 2005. Disferlin geni; sarkolemmal-assosiye proteinlerden birini kodlayan bir gen olup, proteinin azalması veya yokluğu `disferlinopati` ile sonuçlanmaktadır. Disferlinopatilerin patogenezi tam olarak bilinmemekle beraber immün mekanizmalar üzerinde durulmaktadır. Patolojik olarak, ilk hasar plazma membranında meydana gelmektedir. Kas biyopsilerinde elektron mikroskopi ile nekrotik olmayan liflerde plazmalemmal değişiklikler, bazal laminada kalınlaşma, plazma membranının küçük veziküller içeren katmanlarla yer değiştirmesi, papiller uzanımlar ve subsarkolemmal vakuoller görülebilmekte, inflamasyona da rastlanmaktadır. Disferlinopatilerde inflamatuvar hücre infiltrasyonu ağırlıklı olarak makrofaj ve CD4+ hücreleri içermektedir. Bu biyopsi bulguları nedeni ile inflamatuar miyopatilere benzerlik göstermekte ve en sık polimiyozit ile karışabilmektedir. Polimiyozitte nekrotik olmayan kas liflerinin lenfositlerle invazyonu tanı için şarttır. Ayrıca disferlinopatilerde anormal papiller projeksiyonların lizisinde rol oynamak amacıyla MAC (membran atak komplekslin sekonder olarak aktive olabileceği bilinmektedir. Bu çalışmada klinik olarak polimiyozit düşünülen; ancak yoğun immunosupresif tedaviden fayda görmeyen hastalarda disferlinopati olabileceği düşüncesi ile biyopsi materyallerinde disferlin, disferlin proteini ile fonksiyonel ilişkisi açısından kalpain, kas lifi bütünlüğünü göstermek için P-spektrin ve kas lifi nekrozunu saptamak için MAC (C5b9) ile kas biyopsilerinde immunohistokimyasal boyamalar yapılmıştır. Tüm kas biyopsilerinde kalpain boyaması pozitif olarak izlenmiştir. Bu sonuca bağlı olarak çalışmaya alınan kas biyopsilerinde kalpainopatinin olmadığı düşünülmüştür. Disferlin ile negatif boyanan (disferlinopati) kas biyopsilerinin % 71.4'ü (5/9) MAC ile pozitif olarak boyanmıştır. Bu sonuçla disferlinopati olan kas biyopsilerinde MAC ile pozitif boyanmanın nekrotik kas lifleri ve inflamasyona işaret ettiği sonucuna varılmıştır. Anahtar Kelimeler: Polimiyozit, disferlin, disferlinopati, kalpain, MAC Destekleyen Kuruluşlar: HÜTF 02 02.101.008

VI ABSTRACT Mavioglu A., The immunohistochemical evaluation of dysferlin protein in the muscle biopsies revealing inflamation, Hacettepe University Faculty of Medicine, Thesis in Neurology, Ankara 2005. The dysferlin gene encodes a sarcolemmal associated protein that is absent or drastically reduced in patients with dysferlinopathy. Its mechanisms by which it causes muscle fiber injury are not known. Dysferlin is likely required for maintaining the structural integrity of the muscle fiber plasma membrane and plasma membrane injury is an early event in the pathogenesis of dysferlinopathy. Quantative electron microscopy of nonnecrotic muscle fibers revealed the followings: small plasmalemmal defects, thickened basal lamina over some defects, replacement of the plasma membrane by one to multiple layers of small vesicles, papillary projections, and small subsarcolemmal vacuoles. Inflammatory findings in muscle biopsies have previously been described in patients with dysferlin myopathies. The predominant inflammatory cells are macrophages together with CD4+ cells invading degenerating fibers whereas in inflammatory myopathies CD 8+ cells are observed. In this study, we intend to perform the immunohistochemical analysis of patients' dysferlin protein for the differential diagnosis of polymyositis whom are unresponsive to steroids or immunosuppressive drugs and calpain which is functionally related to dysferlin. To demonstrate the muscle fiber necrosis which might be triggered by the presence of a structurally altered membrane, MAC (C5b9) stain and the muscle fiber integrity, p-spectrin stain are performed. All of the muscle biopsies are stained with calpain and no calpainopathy is detected at the end of this study. Besides this, 71.4 % (5/9) of muscle biopsies with disferlinopathy are stained negatively with MAC compatible with the presence of necrotic fibers and inflammation.. Keywords: Polymyositis, dysferlin, dysferlinopathy, calpain, MAC Supported by HUTF 02 02. 1 0 1.008