Kadınlarda fetal Y kromozom mikrokimerizminin nicel polimer zincir reaksiyon yöntemi ile saptanması

Abstract

59 ÖZET Kadınlarda Fetal Y Kromozom Mikrokimerizminin Nicel Polimeraz Zincir Reaksiyon Yöntemi İle Saptanması Gebelik esnasında, plasenta yoluyla, hematopoetik hücrelerin iki taraflı geçişi olmaktadır. Fetüse ait hücrelerin, anne kanına ulaştıkları ve annenin çeşitli dokularına nüfuz ettikleri iyi bilinmektedir (fetüse ait mikrokimerizm). Bir bireyde, genetik olarak farklı bir bireyden alınmış az miktarda DNA ya da hücrenin var olma durumuna `mikrokimerizm` denmektedir. Otoimmün hastalıklarla, kronik graft-versus-host reaksiyonu arasındaki bazı klinik benzerlikler, kadınlarda çocuk sahibi olma dönemini takiben otoimmün hastalıkların artmış insidansı ve mikrokimerizmin anne kanı ya da dokularında uzun dönem varlığını sürdürmesi, otoimmün hastalıkların patogenezinde mikrokimerizmin rol oynayabileceği hipotezini ortaya çıkarmıştır. Bu çalışmanın amacı, kök hücre nakli yapılacak olan kadın hastaların vericilerinden doğum yapmış ve erkek çocuğa sahip olanlarında fetal Y kromozom düzeyi saptanırken GVHH şıklığıyla ilişkisi araştırılmaya çalışılmasıdır. Çalışmamızda, 19 kadın vericinin 17'sinin en az bir erkek çocuk doğumu, 1 'sinin sadece kız çocuk doğumu vardır. 1 vericinin ve ayrıca kontrol grubu olarak çalışmaya dahil edilen sağlıklı 3 kadının ise hiç gebelik öyküsü yoktur. Toplam 1 9 aferez ürünü, Y kromozomuna spesifik DYS14 dizisi için real time nicel PZR yöntemiyle çalışıldı. Erkek DNA' sının nicel miktarını belirlemek için; erkek DNA' sının bir seri dilüsyonuyla, kadın hücrelerinde bulunan 2500, 500, 100, 50, 25 kopya erkek hücresine eşdeğer DNA için Y kromozomuna spesifik standart eğrisi hazırlandı. Yöntemimiz yaklaşık olarak kadın mücrelerinde 25 kopya erkek hücresini belirleyebilecek duyarlılıktadır. Verici ve kontrol grubundaki kadınların aferez ürünlerindeki erkek DNA miktarı militrede kopya sayısı olarak hesaplandı. Çalışılan 19 kadın vericinin 14' ünde belli niceliklerde erkek mikrokimerizmi saptanırken, 5 kadın vericide ve kontrol grubunda saptanamadı. Özetle; erkek mikrokimerizmi kadın vericilerin aferez ürünlerinde sıklıkla bulunmaktadır. Real time PZR sistemi kadınlardaki erkek mikrokimerizmini belirlemede yeterli bir sistemdir. GVH hastalığı, hematopoietik kök hücre nakilleri sonrası yüksek ölüm ve hastalık oranına sahip büyük bir karışıklıktır. GVHH için HLA uyumsuzlukları büyük bir risk faktörüdür. Ayrıca verici uyumunu içeren diğer faktörlerinde GVHH gelişiminde rolünün olduğu düşünülmektedir. Verici birden çok doğum yapmış bir kadın olduğunda GVHH riskinin artış nedeni bilinmemektedir. Çalışılan hasta sayısının azlığından dolayı mikrokimerizminin GVHH üzerine etkisi gösterilememiştir. Mikrokimerizm ve graft versus host hastalığı arasındaki ilişkiyi gösterebilmek için hasta sayısı artırılmalıdır. Bu çalışmaların sonuçlarına göre; eğer fötal mikrokimerizm GVHH gelişimine karışıyorsa daha ileri çalışmaların yapılması gerekmektedir. Anahtar sözcükler: Fötal Y kromozomu, gebelik, mikrokimerizm, otoimmün hastalıklar, real-time nicel PZR

60 SUMMARY Detection of Fetal Y chromosome Microchimerism in women with quantitative PCR technique. During pregnancy, bi-directional trafficking of hematopoietic cells occurs through the placenta. Fetal cells are known to reach the maternal circulation and infiltrate a variety of tissues (fetal microchimerism). The presence of a small population of cells or DNA in one individual that derives from another genetically distinct person is referred to as microchimerism. The clinical similarities between some features of autoimmune diseases and the chronic graft versus host disease, the increased incidence of autoimmune diseases in women after childbearing age, and the long-term persistence of microchimerism in maternal blood / tissues have raised the hypothesis that microchimerism could be involved in the pathogenesis of autoimmune diseases. The aim of this study is to determine whether Y chromosome level is present in apheresis product from female donors who had given birth to at least one son and try to research related to graft-versus-host-disease frequently after hematopoietic stem cell transplantation. In our study, 19 woman were studied, among 19 donors, 17 had given birth to at least one son; 1 had given birth only to daughters; 1 donors and control groups were nulliparous. A total of 19 apheresis products were studied employing Real-Time quantitative PCR for the Y-chromosome specific sequence DYS14. To quantitatively measure male DNA, the Y-chromosome- specific calibration curve was prepared, using a dilution of the equivalent DNA of 2500, 500, 100, 50, 25 male cell in a female background of female cells. The sensitivity of our assay is detection of approximately 25 male cells in female cells. Quantitative results in donors and control groups, expressed in copies per milliliter, was calculated. Among 19 donors, 14 were pozitive for male DNA. Male microchimerism were not detected in five donors and control groups. In summary, male DNA was frequently detected in apheresis products from female donors. The real-time PCR system was sensitive enough to detect male microchimerism in woman. Graft-versus-host disease(GVHD) is a major complication hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) and a leading cause of mortality and morbidity. HLA incompatibility is the strongest risk factor for GVHD, but other factors including donor parity are thougth to play a role. The reasons for increased risk of GVHH when the donor is a parous woman is unknown. Because of the number of the patients, that is not very much, it wasn't shown the effect of microchimerism on GVHD. However, the number of patients must redound to show correlation between microchimerism and GVHD. Based on the result of this present study, whether fetal microchimerism contributes to GVHD merits further study. Anahtar Sözcükler: Autoimmune diseases, fetal Y chromosome, microchimerism, pregnancy, real-time guantitative PCR