Sağlıklı çocuklarda in vitro lenfosit fonksiyonunun iki farklı yöntemle araştırılıp karşılaştırılması

Abstract

Bu çalışma sağlıklı Türk çocuklarında ki in-vitro lenfoproliferatif yanıtın normaldüzeyini belirlemek ve in-vitro lenfosit fonksiyonlarını iki farklı yöntem kullanılarakdeğerlendirmek amacıyla yapılmıştır.Çalışma materyalini Ankara Üniversitesi Tıp fakültesi Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıAnabilim Dalı Sosyal Pediatri Bölümü genel polikliniğine başvuran sağlıklı bebekve çocuklar oluşturmuştur. Bu çalışma Haziran 2005 ? Haziran 2006 tarihleriarasında 0-2, 2-6, 6-10 olmak üzere 3 yaş grubundaki toplam 22 sağlıklı çocuktayapılmıştır. Araştırma Ankara Üniversitesi Tıp Fakültesi Çocuk Sağlığı veHastalıkları ABD, Pediatrik İmmunoloji-Allerji Bilim Dalı araştırma laboratuvarındayürütülmüş ve tüm çalışmalar burada yapılmıştır.Alınan kan örneklerinden, T lenfositler PHA ile uyarıldıktan 24 ve 48 saat sonra,akım sitometrisi ile aktivasyon belirleyicilerinin (CD25+, CD69+) ekspresyonlarınınve 72. saat sonunda ışık mikroskobu ile lenfoproliferatif yanıtının ölçümleriyapılmıştır. Aktivasyon belirleyicilerinin zamana bağlı değişimleri tespit edilmiştir.Daha sonra iki yöntemden elde edilen sonuçlar karşılaştırılmıştır. Yüzeybelirleyicilerinin ekspresyonlarının ölçümü, Coulter EPICS-XL-MCL model akımsitometrisi cihazında, double-colour direkt immünfloresan yöntemi uygulanarakyapılmıştır.Lenfoproliferatif yanıtın değerlendirilmesinde, 0-10 yaş arası 22 olgu 3 yaş grubunaayrılarak incelendiğinde, tüm parametrelerin her çocuğa göre farklılık gösterdiği,zamanla ve yaşla birlikte değiştiği görülmüştür.Çalışmamızda aktivasyon belirleyicilerinin 24. ve 48. saatlerde kendi aralarındakorelasyon gösterdiği saptanmıştır. 24. saatte CD69+, 48. saatte CD25+ekspresyonunun max. düzeye ulaştığı gözlenmiştir. Bunun yanında T lenfosit yüzeyantijenlerinin ekspresyonlarının yaş arttıkça azaldığı tespit edilmiştir.T lenfosit aktivasyon çalışmasında, değerler yaşla birlikte değişim gösterdiğindençocuklarda hücresel immünitenin sayısal parametreleri ancak kendi yaş grubununnormalleri ile karşılaştırıldığında objektif ve sağlıklı olabilmektedir.Çalışılan örnek sayısının az olmasından dolayı, istatistiksel olarak anlamlı bir sonuçelde edilememiş ve sağlıklı çocuk yaş gruplarının normal değerleribelirlenememiştir. Akım sitometrisi ile morfolojik yöntem arasında da anlamlı birilişkiye rastlanmamıştır. Sonuçta her iki yönteminde kullanılabileceği, akımsitometrik yöntemin daha hızlı sonuç verdiği belirlenmiştir. Ancak daha anlamlısonuçlara ulaşılabilmesi ve bu çalışmanın standardize edilebilmesi için daha fazlaörnekle yapılan daha kapsamlı çalışmalara ihtiyaç vardır.Anahtar Kelimeler : CD25+, CD69+, Lenfosit aktivasyonu, Lenfoproliferatif Yanıt,

The aim of this study is to determine normal levels of in vitro lymphoproliferativeresponse in Turkish infants and to study in vitro functions of lymphocytes by usingtwo different methods.Study material was composed of healty babies and infants who applied to AnkaraUniversity Medical School Department of Pediatrics Division of Social Pediatrics.This study including 22 healty infants with three different age groups which are 2, 2-6 and 6-10 was perfomed between June 2005- June 2006.After 24 and 48 hours of T lymphocytes induction by PHA, expression of activationmarkers (CD25+, CD69+) was measured by flow cytometry and at the end of 72ndhour, lymphoproliferative response was measured by light microscope. The changesin activation markers were measured by time, then, the results of the two methodswere compared. Double colour direct immunofluorescence method was used tomeasure expression of surface markers by Coulter EPICS-XL-MCL flow cytometry.When the 22 cases in 0-10 age group, were divided into three sub-goups, it wasobserved that all parameters differed with respect to every infant and changed withage.In our study, it was shown that the activation markers were in correlation with eachothers at the 24th and 28th hours. It was observed that the expression levels ofCD69+ and CD25+ reached to maximum levels at 24th and 28th hours, respectively.Moreover, the expression of T lymphocyte surface antigens were decreasing as theage increased.In the T lymphocyte activation study, since the values were changing with respect toage, the numerical parameters of cellular immunity in infants were objective andreliable only when compared with the normal levels of their age group.However, no statistically significant result was found due to small population size ofour samples and the normal values of healthy infant age groups were not determined.Furthermore, no significant correlation between flow cytometry and morphologicalmethod was found. As a result, it was found that both methods are applicable, andflow cytometry methods give faster results. However, more comprehensive studieswith larger sample size were required in order to reach significant results andstandardise this method.Key Words : CD25+, CD69+, Lymphocyte activation, Lymphoproliferative response