Türkiye`nin değişik bölgelerinden termostabil alfa amilaz üreten Bacillus sp. türlerinin izolasyonu karakterizasyonu ve alfa amilaz geninin klonlanması

Abstract

Bu çalışma kapsamında Türkiye'nin değişik bölgelerindeki doğal sıcak sukaynaklarından (kaplıca kaynaklarından) su örnekleri toplanmış ve bu örneklerdenthermostabil ?-amilaz üreten termofilik Bacillus'lar (optimum üreme sıcaklığı >50°C olan termofilik Bacillus türleri) izole edilmiştir ve Bacillus sp. OZ1 suşunda?-amilaz enzim aktivitesi DNS yöntemi ile belirlenmiştir. Bununla beraber, ?-amilaz enzim üretiminden sorumlu olan ?Amy E? geni uygun primerlerinkullanımı ile uygun koşullar altında Polimeraz Zincir Reaksiyonu ile (PCR)çoğaltılarak pBR322 pilazmid vektörüne takılarak uygun konukçu hücre olan veCaCl2 ile alıcı hale getirilen E. coli DH? suşuna aktarılmış ve genin konukçuhücrede ifadesi gözlemlenmiştir. Rekombinant pilazmidi taşıyan kolonilerinenzim aktivitesi belirlenerek mature enzim aktivitesi ile kıyaslanmıştır.Anahtar Kelimeler: Amy E, ?-amilaz, gen klonlanması, PCR, Termofil Bacillussp., termostabil enzim

In this work, water samples were collected from nature thermal springs locateddifferent areas of Turkey and from these samples, alpha amylase producingthermophile Bacillus sp (optimum growth temperature of > 50°C) were isolatedand among these isolates, ?-amylase enzyme activity of Bacillus sp. OZ1 wasdetermined by DNS method. Besides, the ?AmyE? gene (associated withproduction of ?-amylase) which was amplified by PCR (polymerase chainreaction) reaction by use of suitable primers was cloned into pBR322 vector DNAand transformed into suitable host E.coli DH? which made competent by CaCl2.Following transformation, the expression of gene in host cell was observed.Moreover, the enzyme activities of colonies carrying recombinant plasmid weredetermined and compared with that of mature enzyme.Anahtar Kelimeler: Amy E, ?-amylase, gene cloning, PCR, thermophile Bacillussp., thermostabile enzyme