Homozigot FVL taşıyıcılarında F5 geni promotor bölgesinde yer alan -426G/A gen değişiminin etkisi

Abstract

Kan pıhtılaşma faktörü V (FV), hemostazda hem prokoagülant hem de antikoagülant yolaklarda önemli rol oynayan bir proteindir. Genetik ve edinsel bozukluklar, FV molekülünün aktivitesini veya ekspresyon düzeyini etkileyerek trombotik veya hemorajik olaylara neden olabilmektedir. Venöz tromboz hastalarında FVL mutasyonu vakaların %20'sinde görülmekte olup, seçilen trombofili hastalarında bu oran %50'ye kadar ulaşmaktadır. FVL mutasyonu, koagülasyon inhibitörlerinin eksiklikleri ile aynı etkide risk faktörü olarak görülmektedir. Mutasyonu heterozigot olarak taşımanın tromboz açısından 5 kat risk getirdiği gözlenirken, homozigotluğunun ise bu riski 50-100 kat arasında arttırdığı düşünülmektedir.Bu çalışmada, FVL mutasyon tespiti için eş zamanlı PCR (Real-Time PCR) tekniği kullanılmıştır. F5 geni, promotor bölgesi için uygun primerler kullanılarak polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) yöntemiyle amplifiye edildilmiştir. RFLP (Restriksiyon Parça Uzunluk Polimorfizmi) yöntemiyle elde edilen bant profilleri %3'lük agaroz jelde görüntülenerek -426 G/A gen değişimi saptanmıştır.F5 geni promotor bölgesinde yer alan -426 G/A gen değişiminin tromboz oluşumu üzerine etkisinin araştırılması amaçlanmıştır. FVL mutasyonunu homozigot olarak taşıyan, tromboz geçirmiş ve geçirmemiş bireylerde, -426 G/A gen değişiminin tromboz oluşumu üzerine etkisi araştırılmıştır. FVL mutasyonunu homozigot olarak taşıyan tromboz geçirmiş ve geçirmemiş bireyler arasında -426 G/A polimorfizminin genotip ve allel dağılımı açısından istatistiksel olarak anlamlı bir fark saptanmamıştır.Anahtar Kelimeler : Koagülasyon faktörü V, F5 geni, FVL, Mutasyon, Polimorfizm

Blood clotting factor V is a protein that plays an important role in both procoagulant and anticoagulant pathways of hemostasis. Genetic and acquired disorders can lead to thrombotic and hemorrhagic events by affecting the activity or expression of FV molecule. FVL mutation is seen in 20% of patients with venous thrombosis and this proportion rises to 50% in selected thrombophilia patients. FVL mutation is a risk factor with the same effects as coagulation inhibitor deficiencies. The risk of thrombosis increases 5-fold with heterozygote mutation while a 50-100 fold increase in thrombosis is seen with homozyogote mutation.In this study, real time PCR technique is used to detect FVL mutation. F5 gene is amplified by polimerase chain reaction (PCR) using appropriate primers for promotor region. -426 G/A change is detected by imaging band profiles obtained by RFLP (Restriction Fragment Length Polimorfizm) in 3% agaroz gel.The objective of this study is to find the effect of -426 G/A gene change present in the promotor region of F5 gene on thrombosis. The effect of -426 G/A gene change on thrombosis in individuals who are homozygote for FVL mutation and have or have not had a thrombotic episode is investigated. No significant difference with respect to genotype and allele distribution of -426 G/A polimorfizm was detected between homozygote carriers of the FVL mutation who did or did not suffer a thrombotic episode.Key words: Coagulation factor V, F5 gene, FVL, Mutation, Polimorfizm