Zebularin`in Galleria mellonella L. (Lepidoptera: Pyralidae)`nın antioksidan enzimlerine etkisi

Abstract

Sitozin metilasyonu, DNA'daki sitozin kalıntısını 5-metilsitozine dönüştürmek için bir metil grubu ekleyen süreçtir. Metilasyon sürecine DNA metiltransferazları tarafından aracılık etmektedir. Zebularin (ZEB), ur ve kist tümör hücrelerinde hipermetile edilmiş genleri yeniden aktive eder, ayrıca kanser hücreleri üzerinde tercihli bir etki gösteren DNA metiltransferazları ile kovalent bir kompleks oluşturan sitidin analoğudur. Bal mumu güvesi Galleria mellonella L. (Lepidoptera: Pyralidae) son evre larvalarına farklı dozlarda (0,25-32 mg / ml) verilen ZEB'in antioksidan enzim aktivitesi ve lipid peroksidasyonu üzerindeki etkileri incelendi. G. mellonella erginleri 25 ± 5 ° C' de,% 60 ± 5 RH' (bağıl nem) ve 12: 12 (Aydınlık: Karanlık) saatlik bir fotoperiyod uygulanan laboratuvar şartlarında yetiştirildi. SOD, GST, MDA aktivitesi ticari olarak temin edilen deney kitleri kullanılarak belirlendi. Bir mikroplaka okuyucuda ksantin ve ksantin oksidaz sistemler kullanılarak 450 nm'de SOD absorbansı belirlendi. GST aktivitesi, 1-kloro-2,4-dinitrobenzen ve substrat olarak indirgenmiş glutatiyon ile 5 dakika boyunca 340 nm'de belirlendi. CAT aktivitesi ise, 240 nm'de hidrojen peroksit (H2O2) bozunmasına bağlı olarak absorbanstaki azalmanın ölçülmesiyle tayin edildi. Malondialdehid (MDA), lipid peroksidasyonunun bir göstergesidir. MDA-Tiyobarbitürik asit (TBA) katkısı, MDA ve TBA'nın yüksek sıcaklıkta reaksiyonuyla oluşturuldu ve asidik koşullarda 540 nm'de absorbansı ölçüldü. ZEB enjeksiyonu, son evre G.mellonella larvalarının antioksidan enzim aktivitelerinde değişikliğe neden olmaz iken tüm dozlarda MDA seviyesinde artışa neden oldu. Sonuçlar için iki olası sebep öngörülmektedir. Birincisi, ZEB'in, G. mellonella'da DNA metilasyonu üzerindeki engelleyici etkisinin bir sonucu olabilir, bu da böceklerde gen transkripsiyonunun azaltılmasına yol açabilmektedir. İkincisi, yüksek oksidatif stresin enzimlerin azalan aktivitesine neden olmasıdır.

Cytosine methylation is a process that adds a methyl group to a cytosine residue of DNA to convert it to 5-methylcytosine. The process of methylation is mediated by DNA methyl transferases. Zebularine (ZEB) reactivates hypermethylated genes in yeast and solid tumor cells, with DNA methyltransferases that show a preferential effect on cancer cells, is a cytidine analog that forms covalent complex. Were investigated the effects of various doses (0.25-32 mg/ml) of ZEB, on antioxidant enzymes activity and lipid peroxidation in wax moth Galleria mellonella L. (Lepidoptera: Pyralidae) in the of last instars. G. mellonella were grown at 25 ± 5 ° C, 60 ± 5 RH (relative humidity) and 12: 12 (light: dark) hours of a photoperiod applied laboratory. SOD, GST, and MDA activities were determined using commercially available test kits. Absorbance was read in a microplate reader and SOD activity was determined at 450 nm using xanthine and xanthine oxidase systems. GST activity was determined with 1-chloro-2, 4-dinitrobenzene and reduced glutathione as substrates at 340 nm for 5 min. CAT activity was determined by measuring the decrease in absorbance at 240 nm due to hydrogen peroxide decomposition. Malondialdehyde (MDA) is an indicator of lipid peroxidation. The complex of MDA-Thiobarbituric acid (TBA) was determined by high temperature reaction of MDA and TBA and absorbance was measured at 540 nm under acidic conditions. Injection of ZEB in last instars G. mellonella resulted in a considerable increase in MDA level at all doses but not in antioxidant enzyme activities. Two possible reasons may be to explain of these results. First, this effect could be a result of the inhibitory effect of ZEB on DNA methylation in G. mellonella, which leaded to reducing gene transcription in insects. Second, it was likely that high oxidative stress might cause a decreasing activity of enzymes.