Miyelodisplastik sendrom (MDS) ve akut miyeloid lösemi (AML) hastalarının kemik iliği kaynaklı mezenkimal kök hücrelerinin (MKH) karakterizasyonu ile gen/ mikrorna (miRNA) ifade profillerinin sağlıklı kontroller ile karşılaştırmalı analizi

Abstract

Miyelodisplastik Sendrom (MDS) ve Akut Miyeloid Lösemi (AML) kemik iliğindeki kök hücreleri etkileyen klonal hastalıkların heterojen gruplarını temsil etmektedir. Mikroçevre direkt olarak hematopoetik hücrelerle etkileşime girerek ve/veya düzenleyici moleküller salgılayarak hematopoezi düzenler. Hematopoetik mikroçevrenin ana bileşeni mezenkimal kök hücreler (MKH)'dir. MKH'lerin hastalık patogenezine katkısı yeterince araştırılmamıştır.Bu çalışmada 22 MDS/AML hastası ve 8 sağlıklı kontrol kemik iliğinden MKH'ler izole edilmiş ve hücre kültürlerinde çoğaltılmıştır. MKH karakterizasyonu için yüzey antijen özellikleri akım sitometrisiyle analiz edilmiştir. MKH'lerin osteojenik ve adipogenik farklılaşma potansiyelleri test edilmiştir. MKH'lerden RNA izole edilmiş, daha sonra miRNA mikrodizin teknolojisiyle miRNA ifade profilleri analiz edilmiş ve farklılık gösteren miRNA'lar eş zamanlı PZR ile doğrulanmıştır. Biyoinformatik analizler ile miRNA'lar tarafından düzenlenen edilen genler belirlenip mRNA seviyeleri hastalar ve normal kontrollerde karşılaştırılmıştır. DICER1 gen ifade profili hasta ve normal örnekler arasında incelenmiştir.

Myelodysplastic syndrome (MDS) and Acute Myeloid Leukemia (AML) represent the heterogenous groups of clonal diseases that affect the stem cells in bone marrow. The microenvironment can regulate hematopoiesis by interacting directly with hematopoietic cells and/or by secreting regulatory molecules. The key component of the hematopoietic microenvironment is mesenchymal stem cells (MSCs). The contribution of MSCs to disease pathogenesis has remained poorly explored.In this study MSCs were isolated from the bone marrow of the 22 MDS/AML patients and 8 controls and expanded in the cell culture. The surface antigen features of MSCs were analyzed by flow cytometry for MSC characterization. The osteogenic and adipogenic differantiation potentials of MSCs were also tested. RNA isolation was performed from MSCs and then miRNA expression profiles of MSCs were analysed by microarray technology. Differentially expressed miRNAs were validated by qRT-PCR. The genes regulated by miRNAs were identified by bioinformatic analyses and their mRNA levels were compared in patients and controls. DICER1 expression profiles were also be investigated in normal and patients.