Karaciğer fibrozisinde etken olabilecek aday miRNA`ların hepatik stellat hücrelerinde araştırılması

Abstract

Karaciğer fibrozisi, karaciğerde meydana gelen kronik yaralanmanın iyileşmemesidurumunda ilerleyerek, siroza, hepatosellüler karsinomaya ve karaciğer yetmezliğineneden olabilecek ciddi bir rahatsızlıktır. Karaciğer fibrozisinin oluşmasında vedevamlılığında hepatik stellat hücrelerinin programlı bir şekilde sessiz hallerinden aktifhallerine geçmeleri oldukça etkilidir. miRNA'lar yaklaşık olarak 22 nükleotit uzunluğundakodlanmayan kısa RNA parçalarıdır. miRNA'ların sahip oldukları biyolojikkarakterlerinden dolayı hastalıklarda terapötik ajanlar olarak düşünülebilmektedirler.Karaciğer fibrozisinin önüne geçebilmek için miRNA'ların hepatik stellat hücreleriarasındaki etkileşimlerine yönelik çalışmalar yapılmaktadır. Fakat karaciğer fibrozisineolan etkisi açıklığa kavuşturulmamış olan fazla sayıda miRNA da bulunmaktadır.Bu tez çalışmasında karaciğer fibrozisi üzerine etkisi olabileceği düşünülen miR-132, miR-138, miR-758, miR-130a ve miR-223 miRNA'lar ve bu miRNA'ların hedef genleri ile olanilişkisi ilk kez insan hepatik stellat hücre hattı olan LX-2'de araştırılmıştır.Belirlenen aday miRNA'lar ve hedef genleri ile olan ilişki eş zamanlı PZR deneyleri ilearaştırılmış, elde edilen verilere göre yalnızca miR-138'in LX-2 hücre hattında pro-fibrotiketkiye sahip olduğu istatistiksel açıdan anlamlı bulunmuştur. Diğer miRNA'ların fibroziseolan etkisi istatistiksel açıdan anlamlı bulunamamıştır. miR-138 ve hedef geni SIRT1arasındaki ilişki aynı zamanda western blot analizi ile irdelenmiş ve istatistiksel açıdananlamlı sonuçlara ulaşılmıştır.

Liver fibrosis is a severe disease that can lead to cirrhosis, hepatocellular carcinoma and liverfailure if the chronic injury in liver does not heal. The occurrence and persistence of liver fibrosis ishighly influenced by the programmed transformation of hepatic stellate cells from quiescent toactive state. miRNAs are non-coding short RNAs around 22 nucleotides. Because of theirbiological characteristics, miRNAs can be considered as therapeutic agents in diseases. In order toprevent liver fibrosis, studies regarding the interactions between miRNAs and hepatic stellate cellshave been conducted. However, there are a large number of miRNAs whose effect on liver fibrosishave not been elucidated yet.In this thesis, involvement of miR-132, miR-138, miR-758, miR-130a and miR-223, which arethought to have a role in liver fibrosis, and their target genes in human hepatic stellate cell line,LX-2, was investigated.The candidate miRNAs and their relationships with the related target genes were determined byreal time PCR experiments. It was found that only miR-138 had statistically significant pro-fibroticactivity in the LX-2 cell line. The fibrosis effect of other miRNAs was not determined asstatistically significant. The relationship between miR-138 and its target gene SIRT1 was alsoshown by western blot analysis and statistically significant results were obtained.