Mikroyerçekim biyoreaktöründe adipoz kök hücrelerden kardiyak hücrelerin üretilmesi

Abstract

Bu çalışmada insan kaynaklı adipoz kök hücrelerin yüksek oranda kardiyak karakterli hücrelere farklılaştırılması için yeni bir yöntem geliştirilmesi amaçlanmıştır. İnsan adipoz kök hücreleri üç boyutlu mikroyerçekimi biyoreaktöründe kültür edilerek çoğaltılmıştır. 5-Azasitidin indüksiyonu sonrasında kardiyak büyüme besi ortamında kültür yapıldı. Hücrelerin farklılaşma veriminin arttırılması amacıyla, doğal elastinden oluşan elastik hidrojel mikroküreler sentezlenmiştir ve karakterizasyon sonrasında mikroyerçekimi kültürü ortamında hücrelerle beraber kültürü yapılmıştır. Kültür süreci sonunda elde edilen hücre gruplarına uygulanan kantitatif eş zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu ile kalp gelişimine ve erişkin kalp hücrelerine özgü genlerin ifade düzeyleri incelenmiştir. Gen bazında gruplar arasında bağıl gen ifadesi düzeyleri açısından değişim görülmüştür, buna karşın gen ifadesi düzeyleri bir arada değerlendirildiğinde deney koşulları arasında istatistiksel açıdan anlamlı fark bulunmamaktadır.

This study aims to develop a new method for differentiating human adipose stem cells into cells with cardiac characteristics in high volumes. Human adipose stem cells were cultured and proliferated in three dimensional microgravity bioreactor. Cardiac differentiation was induced with 5-Azacytidine and cells were further cultured in a cardiac growth medium. To induce a higher degree of cardiac differentiation, groups of cells were cultured in the presence of elastic hydrogel micropheres derived from natural alpha elastin. The resulting cell populations were investigated by using quantitative real-time polymerase chain reaction technique for the analysis of expression levels of genes related to cardiac differentiation and adult cardiomyocytes. Our results showed no significant overall difference between groups, however there were changes in the gene expression levels of some cardiac genes.