Fare embriyonik kök hücrelerin kültürü, farklılaşması ve karakterizasyonu

Abstract

FARE EMBRİYONİK KÖK HÜCRELERİN KÜLTÜRÜ, FARKLILAŞMASI veKARAKTERİZASYONUÖZETSunulan tez çalışmasında embriyonik kök hücrelerin kültür ortamında farklılaşması veuygulanan RA'e bağlı olarak nöronal farklılaşma oranlarının artırılması hedeflenmiştir. Buçalışma doku ve hücre hasarlarının tedavisi için bir model olabileceği düşünülmüştür.Çalışmada fare embriyonik kök hücrelerinin besleyici tabakalar üzerinde kültürü,spontan ve nöronal farklılaşması üzerinde yoğunlaşılmıştır. Nöronal farklılaşma için RAkullanılmıştır. RA'ın zaman ve konsantrasyon bağımlı değişimleri incelenmiştir.Fare embriyonik kök hücreleri çalışmanın ilk aşamasında besleyici tabakalar üzerindekültüre edilmiştir. İkinci kısımda ise embriyonik kök hücrelerin spontan olarak farklılaşmalarısağlanmıştır. Bir sonraki aşamada RA uygulanarak kök hücrelerin nöronal farklılaşmalarısağlanmıştır. Uygulanan RA'ın verilme zamanı ve konsantrasyonları değiştirilerekfarklılaşmayı nasıl etkilediği araştırılmıştır.Sonuçlar, besleyici tabakaların embriyonik kök hücrelerin pluripotent özelliklerinikorudukları göstermiştir. Spontan farklılaşma esnasında ilk olarak mezodermal kökenlihücrelerin oluştuğu ve bu hücrelerin hücre populasyonun çoğunu oluşturduğu, bunun yanı sıraaz sayıda nöronal hücrelerinde meydana geldiği gösterilmiştir. RA uygulamalarında ise,RA'ın düşük konsantrasyonlarının nöronal farklılaşmayı uyardığı fakat mezenşimal kökenlihücrelerinde meydana geldiği gösterilmiştir. Yüksek konsantrasyonlarda mezenşimalfarklılaşmaya rastlanmamıştır.Anahtar Kelimeler: Embriyonik kök hücre, spontan farklılaşma, nöronal farklılaşma,retinoik asit

CULTIVATION, DIFFERENTIATION AND CHARACTERIZATION OFMOUSE EMBRYONIC STEM CELLSABSTRACTIn the present study was aimed to investigate the differentiation of embryonic stemcells in vitro with or without RA. This study is important in providing information for thefurther stem cell therapies.In the present study, mouse embryonic stem cells were cultured on feeder layers andtheir spontaneousous and neural differentiation capacity was investigated. Neuraldifferentiation was induced with RA. In culture conditions, RA?s time and dose-dependenteffects were investigated.In the first part of the study, mouse embryonic stem cells were cultured on feederlayers. Later, spontaneous differentiation of embryonic stem cells was done. Then neuraldifferentiation was induced with RA and time and dose-dependent effects of RA wereinvestigated.Results of the present study, feeder layers inhibited the differentiation of embryonicstem cells. During the spontaneous differentiation, the cells began to beat just like cardiaccells which are derived from mesoderm. In addition, small amounts of neural cells werevisualized. Low concentrations of RA induced neural differentiation, however distinctmezenchymal cells were also demonstrated. High concentration of RA did not induce anymezenchymal cells.Keywords: Embryonic stem cells, spontaneous differentiation, neural differentiaition,retinoic acid