Diabetes mellitus tip 1 oluşturulmuş erkek farelerden elde edilen spermlerin ıvf uygulamalarında fertilizasyon ve embriyo kalitesi üzerindeki etkilerinin incelenmesi

Abstract

Bu çalışmadaki amacımız streptozotosin (STZ) uygulaması ile kronik tip 1 diyabet oluşturulmuş erkek farelerden elde edilen spermlerin morfolojisini, motilitesini, fertilizasyon ve sonrasında oluşan embriyo kalitesini gözlemlemektir.Çalışmamızda CD-1 ırkı 12 haftalık dişi ve erkek fareler kullanıldı. Erkek fareler kontrol ve diyabet grubu olmak üzere ikiye ayrıldı. Diyabet grubuna sitrat içinde çözünen streptozotosin intraperitonal olarak uygulanırken, kontrol grubuna sadece sitrat verildi. Streptozotosin ile meydana gelen tip 1 diyabetin kronikleşerek fare üreme sistemine etki edebilmesi için fareler bir ay sonra sakrifiye edildi. Epididimis ve vas deferensleri alınarak spermleri toplandı. Dişi farelere folikül gelişimlerini stimüle etmek amacıyla kontrollü ovaryan stimülasyon uygulandı. Sonrasında ovidukt ve ovaryumları alınarak oositleri toplandı. Kontrol ve diyabet grubunda kullanılacak olan oositler arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark olmadığı saptandı.Diyabet ve kontrol grubuna ait farelerin sperm yaymaları yapıldı. Diff-Quik boyası ile boyanarak morfolojileri değerlendirildi. İki grup arasındaki morfoloji kriterleri kıyaslandı.Yine bu gruplara ait spermlerin motiliteleri değerlendirildi. En az üç farklı sahada ileri ve düzgün doğrusal hareketli spermlerin sayımı yapılarak oran cinsinden kıyaslandı.Elde edilen diyabetik ve kontrol grubu spermler ile oosit hücrelerine IVF uygulandı. IVF uygulamasından 16-18 saat sonra fertilizasyon değerlendirilmesi yapılarak döllenen embriyolar takip edildi. Kontrol grubu spermlerden oluşmuş embriyolar ile diyabet grubu spermlerinden oluşmuş embriyolar kıyaslandı, bulguları değerlendirildi.Çalışmamızın sonucunda, diyabetik gruptan topladığımız spermlerin kontrol grubuna göre morfolojik olarak, anormal sperm miktarının daha fazla olduğu, bununla orantılı olarak anormal morfolojiler tek tek değerlendirildiğinde her bir anormal kriterin diyabetli grupta istatistiksel olarak anlamlı derecede artış gösterdiğini saptadık.Motilite açısından değerlendirdiğimizde, spermlerin diyabet grubunda kontrol grubuna göre anlamlı derecede daha yavaş olduğunu tesbit ettik (p<0.0001).Diyabetik farelerin spermi ile döllenen embriyolarda fertilizasyon oranı kontrol grubuna göre anlamlı derecede düşük bulundu (p=0.000). Fertilize olan oositlerin oluşturduğu embriyolar, 3. gün sonunda incelendiğinde iyi kalite embriyolar (Grade A) iki grup arasında istatistiksel olarak anlamlı çıkmadı (p=0.376). Fakat kötü kalite embriyoların (Grade B) oranı, diyabetik farelerde istatistiksel olarak anlamlı derecede düşük bulundu (p=0.001). Bu süre sonunda diyabetik farelerde gelişimi durmuş embriyo oranı istatistiksel olarak anlamlı derecede yüksek bulunmuştur (p=0.003).Çıkan sonuçlar göstermektedir ki; kronik DM Tip 1 hem sperm morfoloji ve motilitesini hem de fertilizasyon oranını düşürmektedir. Ayrıca embriyo yarıklanma kabiliyetini azaltmakta, gelişimi duran embriyo oranını arttırmaktadır. Ancak iki grup arasında Grade A embriyo oranı açısından anlamlı derecede fark olmaması kullandığımız IVF metodunun doğal yollardan iyi kalite sperm seçme kabiliyetinden kaynaklandığını düşünmekteyiz. Tüm bu sonuçlar diyabetin üreme üzerine olumsuz etki gösterdiğini düşündürmektedir.Anahtar kelimeler: Diff-Quik, DM, kontrollü ovaryan stimülasyon, streptozotosin, IVF.

Our goal in this study is to observe the quality of embryo that occurs after, morphology, motility and fertilization of the sperms obtained male mice which are made chronic type 1 diabetic with streptozotocin (STZ) treatment.In our study, 12-week female and male CD-1 races mice were used. Male mice were divided into two groups of control and diabetic. Streptozotocin, which dissolves in citrate, was applied as intraperitoneal to the diabetic group whereas only citrate was given to the control group. In order to make type 1 diabetes formed by streptozotocin to become chronic and to effect the reproductive system of the mice, the mice were sacrificed a month later. The sperms of the mice were collected by taking epididymis and vas deferens of the mice. Controlled ovarian stimulation was applied to the female mice in order to stimulate follicle developments of them. Later, oocysts of the mice were collected by taking oviduct and ovaries of the mice. It was recognized that there weren?t any considerable differences between oocysts which were going to be used in the control and diabetic groups statistically.Smear of sperms of the mice belonging to diabetic and control groups are made. Their morphologies are evaluated by staining with Diff-Quik stain. The morphology criteria between the two groups are compared.The motilities of the sperms again belonging to these groups were evaluated. By counting the numbers of the sperms with forward and normal linear motility at least in 3 different fields, there were compared in terms of ratio.IVF was treated in oocyst cells and diabetic and control group sperms obtained. Fertilized embryos were followed after making fertilization evaluation 16-18 hours after IVF treatments. The embryos of control group sperms and the embryos of diabetic group sperms were compared and findings were evaluated.As a result of our study, we found that the sperms we collected from the diabetic group have more abnormal sperms than the sperms of the control group morphologically, and proportionally, when the morphologies are evaluated one by one, each abnormal criterion of the diabetic group increased significantly in a statistical manner.When we evaluated in terms of the motility, the sperms of the diabetic group were significantly slower than the ones in the control group (p<0.0001).In the embryos which were fertilized with the sperms of diabetic mice, the ratio of the fertilization were found considerably lower than the control group (p=0.000). When the embryos made by fertilized oocyst examined at the end of the third day, there weren?t any significant difference between the two groups in terms of good quality embryos (Grade A) statistically (p=0.376). However, the ratio of the bad quality embryos (Grade B) was found significantly lower in the diabetic mice in a statistical manner (p=0.001). Besides, the ratio of the embryos of which stopped developing at the end of this time was also found significantly higher in the diabetic mice (p=0.003).The results show that; chronic DM Type 1 reduces both the ratio of the morphology and the mortility and the ratio of the fertilization of the sperms. Besides, it decreases the cleavage capability of the embryos and increases the ratio of the embryos which stops to develop. However, we think that the reason for not being any significant difference in terms of Grade A embryo ratio between two groups is that IVF method we used have the capability of selecting good quality sperms in natural ways. All these results suggest that the diabetes shows negative effects on reproduction.Key words: Diff-Quik, DM, controlled ovarian stimulation, streptozotocin, IVF.