Postnatal Fare Ovaryumunda Yeni Oosit ve Folikül Gelişimi

Abstract

Bu çalışmada; son yıllardaki oldukça tartışmalı bir konu olan postnatal fare ovaryumunda yeni oosit ve folikül gelişimini immünohistokimya, Western Blot ve RT-PCR yöntemleri ile tespit etmeyi amaçladık.Çalışmamızda, seksüel olarak matür, 25 adet dişi ve 5 adet erkek fare kullanıldı. İki adet dişi fare ve bir adet erkek fare bir arada olacak şekilde çiftleşmeleri için bir gece aynı kafeste bırakıldı. Dişi farelerden smear alınarak lamlara yayma yapıldı. Spermatozoa gözlenen gün hamileliğin 0. günü olarak kabul edildi. Doğan dişi farelerden bir grup10 gün sonunda, bir grup 1 ay sonunda diğer bir grupta 2 ay sonunda sakrifiye edildi. Ovaryumlarından bir tanesi immünohistokimyasal çalışmalar için diğeri ise Western blot ya da RT-PCR tekniklerinden bir tanesini uygulamak için saklandı.Çalışmamızın sonucunda, oosit belirteci olarak kullandığımız Zp3 ve GDF9, primordiyal germ hücre belirteci olan Stella ekspresyonunu bütün deney gruplarında immünohistokimyasal, Western blot ve RT-PCR yöntemleri ile tespit ettik. Mayoz hücre belirteci olarak kullandığımız SCP3 ekspresyonunu ise deney gruplarımızın hiçbirisinde immünohistokimyasal ve Western blot yöntemi ile tespit edemedik ancak RT-PCR yöntemi ile gösterdik.Çıkan sonuçlar doğrultusunda;SCP3 proteinini, genini ve ekspresyonunu gösteremeyişimiz postnatal dönem fare ovaryumunda mayoz bölünmeye geçiren bir hücrenin olmadığını göstermiştir. Stella ekspresyonunu durumda olmadığını göstererek; ekspresyonunu saptadığımız hücrenin primordiyal germ hücresi olmadığını göstermiştir. GDF9 ekspresyonunun bütün deney gruplarında gösterilmesi folikül gelişiminin sürekli olduğunu göstermiştir.Ekspresyonuna prenatal dönemde başlanan Zp3 ekspresyonunu bütün deney gruplarında göstererek postnatal dönemlerde yoğun olarak sentezlendiğini belirttik. Sonuç olarak, postnatal dönem fare ovaryumda, kullandığımız tekniklerle primordiyal germ hücresinin ve yeni oosit gelişiminin izine rastlayamadık.

In this study, we aimed to detect new oocyte and follicle development in postnatal mouse ovarium, immunohistochemistry, Western blot and RT-PCR methods.In our study, 25 sexually female and 5 male mice were used. Two female and one male mice were left in a cage all night for breeding. Smear was taken from female mice and mounted on slides. The day which spermatozoa was observed was accepted as the day 0 of pregnancy.First group was sacrified after 10 days, the second at the end of 1 month and the third one after 2 months.At the end of our study, we detected expressions of oocyte markers Zp3 and GDF9, and Stella in all experimental groups by immunohistochemical, Western blot and RT-PCR methods. We could not observe SCP3expression in any of our study groups immunohistochemical and Western blot methods; however, we could show by RT-PCR.In line with the results; nonexistence of SCP3 protein, gene and expression shows that there is not any new cell which starts meiosis in postnatal term mouse ovary. Stella isn?t active ;means that the cell which we determine the expression is not the primordial germ cells.To show GDF9 expression in all the experimental groups shows that the development is continuous.We indicated that it is being synthesised in a period of postnatal by showing Zp3 expression in the all experimental groups As a result, in the postnatal mouse ovarian, we could not determine any primordial germ cell and oocyte development by the techniques we used.