Mezenkimal kök hücrelerde rekombinant tirozin hidroksilaz enziminin ekspresyonu

Abstract

Sunulan tez çalışmasında amaç mezenkimal kök hücreler (MKH) kullanılarak Parkinson hastalığı gibi dopamin biyosentezine bağlı bazı hastalıklarda önemli rol oynayan tirozin hidroksilaz (TH) enziminin rekombinant olarak ifadesinin sağlanması ve nöral faklılaşma sürecinde bu ekspresyonun hücrelere olan etkisinin gözlenmesi hedeflenmiştir. TH enzimi katekolaminlerin biyosentezinde hız sınırlayıcı olarak rol oynamaktadır. TH beyinde adrenal medullada ve sempatik innervasyonlu dokularda bulunmakta olup tirozini hidroksilleyerek 3,4-dihidroksifenilalanin (L-DOPA)? e dönüşümü sağlar. TH ifadesinin düzenlenmesi katekolaminlerin nörofizyolojideki kayda değer rolü nedeni ile çok dikkat çekmiştir. Parkinson hastalığı gibi nörolojik hastalıklarda önemli rol oynadığı gösterilmiştir. TH eksikliği sonucunda DOPA duyarlı Dystonia ve Juvenil Parkinsonizm görülmektedir.Bu çalışmada sıçan kemik iliği kaynaklı mezenkimal kök hücreler (sKİ-MKH) izole edilmiş ve bu hücrelere sıçan beyninin oksipital korteks dokusundan izole edilen TH geninin aktarımı gerçekleştirilmiştir. Transforme edilmiş bu kök hücrelerin TH enzim ifadesini ve TH geni aktarımı sonrasında bu aktarımın hücreler üzerindeki etkisi ayrıca bununla birlikte TH enzim veriminin arttırılması üzerine çalışılmıştır. TH geni aktarılmış MKH (TH-MKH)? ler ayrıca farklı süreler için nörojenik farklılaştırmaya alınmıştır. TH enzim veriminin 30 saatlik inkübasyonda en yüksek olduğu gözlenmiştir. Statik kültürün haricinde kurulan sürekli kültür sisteminde kültüre edilen TH-MKH? lerden salgılanan enzim miktarının yaklaşık üç kat daha fazla olduğu gözlemlenmiştir. Karakterizasyon amaçlı yapılan analizlerde ise bu hücrelerin gibi farklılaşmaya açık fakat klasik MKH karakterinden bağımsız, TH enzim salınımı yapabilen dopaminerjik hücre benzeri hücrelere dönüşmüş oldukları gözlemlenmiştir.

Purpose of thesis submitted mesenchymal stem cells (MSCs) on the biosynthesis of dopamine in certain diseases, such as Parkinson's disease using the important role of tyrosine hydroxylase (TH) as the expression of the recombinant enzyme, and neural differentiation in the process of ensuring the observation of the effect of the expression of targeted cells. Rate-limiting enzyme in the biosynthesis of catecholamines play a role in TH. TH is located in the brain tissues innervated by the sympathetic adrenal medulla and tyrosine hidroksilleyerek 3,4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA) to provide transformation. TH expression regulation has received much attention because of the role of catecholamines in neurophysiology remarkable. Neurological diseases such as Parkinson's disease has been implicated as important. DOPA and Juvenile Parkinsonism Dystonia is a result of the lack of TH-sensitive.In this study, the rat bone marrow-derived mesenchymal stem cells (rBM-MSCs) were isolated and those cells isolated from rat brain tissue occipital cortex was TH gene transfer. These stem cells that have been transformed and TH gene expression in the TH enzyme After transferring the transfer effect on the cells also increase the yield of enzyme TH however studied. TH-MSCs were also differentiate neurogenic for different durations. TH enzyme has been observed that the highest yield of 30 hour incubation. Static culture, continuous culture system was established except for the amount of enzyme secreted by cultured TH-MSCs were observed to be approximately twice as much. As in the analysis for the characterization of these cells to differentiate in the open, but independent of the classic character of MSCs, TH enzyme release was observed to be capable of morphing into dopaminergic neuron-like cells.