Sığırlarda Brucellosis`in kan serumunda ELİSA ile teşhisi ve diğer serolojik testlerle karşılaştırılmalı araştırılması

Abstract

63 6. ÖZET Bu çalışmada rastgele örnekleme metodu ile aşısız sığır ve abort bildirilen sürülerden alman kan serumu örneklerinde B. abortus'a. karşı şekillenen antikorları Enzyme-Linked- Immunosorbent Assay (ELISA) ile saptamak, sonuçlan diğer konvansiyonel testler (Rose Bengal Plate Test (RBPT), Serum Aglutinasyon Test (SAT) ve Micro Complement Fixation Test (MCFT)) ile karşılaştırarak, Elazığ ilinde sığır Brucellosisi'nin prevalansını ölçmek amaçlandı. ELISA'da; ısı ile inaktive edilen B. abortus S-99 susunun sonikasyon antijeni, peroksidaz enzimi ile işaretli anti-bovine IgG (Whole molecule) konjugatı ve O- phenylenediamine Dihydrocloride(OPD) substratı kullanıldı. Elazığ merkez ve ilçelerine bağlı yerleşim birimlerinden rastgele örnekleme metodu ile aşısız sığırlardan ve abort bildirilen sürülerden alman toplam 525 adet kan serumunda ELISA ile 34(%6.48), RBPT ile 21(%4), SAT ile 18(%3.43) MCFT ile 20(%3.80) adet pozitiflik saptandı. Bu veriler karşılaştırıldığında; ELISA ile RBPT ve MCFT arasında istatistiksel bir farklılığın olmadığı(P>0.05), fakat ELISA ile SAT sonuçlan arasında önemli (PO.05) bir farklılığın olduğu belirlendi. ELISA sonuçlarının RBPT, SAT ve MCFT sonuçlanyla karşılaştınlması neticesinde, kappa değerleri sırasıyla %71, %68 ve %73 (orta derecede uyum) olarak saptandı. Aynca MCFT referens test kabul edildiğinde ELISA'nın sensitivitesi % 100 ve spesifitesi %97.2 olarak tespit edildi. Sığır Bmcellosis'inin prevalansını ölçmek amacıyla rastgele örnekleme metodu ile alman toplam 483 adet aşısız sığır kan serumunda en duyarlı test olan ELISA ile %3.52 seropozitiflik saptandı. Abort bildirilen sürülerden alman 42 adet kan serumunda ise ELISA ile %40.47 oranında pozitiflik tespit edildi. ELISA ile pozitif sonuç veren kan serumu örneklerinin ait olduğu sığırların yaş, cinsiyet ve ırk durumlan gözönüne alınarak değerlendirildiğinde; hastalığın 2 yaşm üzerindeki dişi sığırlarda ve yerli ırklarda daha fazla görüldüğü saptandı. Sığırlarda Brucellosis'in serolojik teşhisinde değişik antikor gruplan (IgG, IgM) ile çalışan konvansiyonel testler (RBPT, SAT, CFT gibi) ile birlikte ELISA gibi oldukça duyarlı ve spesifik bir testin kullanılmasının enfekte ve reaktör hay vardamı saptanmasında son derece yararlı olacağı sonucuna vanldı. Anahtar Kelimeler : Brucellosis, Sığır, ELISA, Serolojik Testler.

64 7. SUMMARY The aims of this study were to determine prevalence of Brucellosis by investigating antibodies against B. abortus with Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) in serum samples randomly collected from non-vaccinated and aborted cattle in Elazığ province and to compare ELISA results with other conventional tests (Rose Bengal Plate Test (RBPT), Sera Agglutination Test (SAT) and Micro Complement Fixation Test (MCFT)) results. Sonicated antigen prepared from heat inactivated B. abortus S-99 strain, peroxidase labelled anti-bovine IgG (Whole molecule) conjugate and O-phenylenediamine Dihydrocloride (OPD) substrate were used in ELISA: A total number of 525 blood samples collected from non- vaccinated and aborted cattle in Elazığ and its districts were examined. Thirty four (6.48%) samples in ELISA, 21(4%) in RBPT, 18(3.43%) in SAT and 20(3.80%) samples in MCFT were determined as positive. In cattle comparison of the results of these tests; a statistically significant difference was obtained between ELISA and SAT results (PO.05), whereas the difference between ELISA and RBPT and MCFT were not significant (P>0.05). Fair agreements between ELISA and RBPT, SAT and MCFT results were detected with kappa values of 71%, 68% and 73% respectively. When MCFT is also accepted reference test, the sensitivity and specificity of ELISA were determined to be 100% and 97.2%, respectively. In the examination of 483 blood samples collected from non-vaccinated cattle, the prevalence of Brucellosis was estimated to be 3.52%(17/483) in ELISA. On the other hand, a high proportion (40.47%) of seropositivity was determined in the examination of 42 sera collected from aborted cattle. When the positive ELISA results were evaluated taking the age, sex and breed of the cattle in to consideration, the frequency of the disease was determined to be higher in female natural breed at the age over 2 years. It was concluded that the use of highly sensitive and specific ELISA as a test together with conventional tests (e.g. CFT, SAT, RBPT) which are performed with different antibody classes (IgG,IgM) may help identify infected and reactor animals. Key Words : Brucellosis, Cattle, ELISA, Serological Tests.