Sığır herpes virüs 1 (BHV-1) proteinlerinin immunoperoksidaz, elektroforez ve vesatern immunoblotla incelenmesi

Abstract

42 7- ÖZET Sığır herpes virüs 1 (BHV-1) proteinleri üç farklı test ile çalışıldı. Öncelikle, BHV-1 infeksiyonunun farklı saatlerinde viral proteinlerin hücre içi lokalizasyonları immunoperoksidaz (İP) testiyle araştırıldı. Gerçekleştirilen İP testinde infeksiyonun ilk saatlerinde viral proteinler infekte hücrelerin nükleusunda belirlendi. İnfeksiyon ilerledikçe hücrenin sitoplazmasmda viral proteinlerin miktarının arttığı kaydedildi. Sığır herpes virüs 1 proteinlerinin SDS-PAGE ile analizi amacıyla BHV-1 infekte MDBK ve kontrol MDBK hücre lizatları % 10'lıık poliakrilamid jelde elektroforez edildi. Proteinlerin belirlenmesi için jelin Coomassie mavi ile boyaması yapıldı. Boyama neticesinde, infekte MDBK hücrelerinde 50 farklı protein tespit edilirken kontrol MDBK hücrelerinde 20 farklı protein belirlendi. Ancak, viral proteinlerin tam bir analizi yapılamadı. Elektroforezleri yapılan infekte MDBK ve VERO hücre proteinleri i m m un tavşan serumu kullanılarak Vestern blotta da çalışıldı. Vestern blot neticesinde, molekül ağırlıkları yaklaşık olarak 55, 75 ve 180 kDa proteinlerin BHV-l'in immunojenik proteinleri oldukları belirlendi.

43 8- SUMMARY Study of Bovine Herpes Virus 1 (BHV-1) Proteins with Immunoperoxidase, Electrophoresis and Western Immunoblot Methods. Bovine herpes virus 1 (BHV-1) proteins were studied with three different methods. Initially, Immunoperoxidase (IP) test was used to investigate the intracellular localization of viral proteins at different stages of BHV-1 infection. Viral proteins were determined to be in the nucleus of infected cells at the early hours of infection. It was noted that, as the infection progressed, viral proteins started to accumulate in the cytoplasm. In order to analyse BHV-1 proteins by SDS-PAGE, BHV-1 infected MDBK and control MDBK cell lysates were subjected to electrophoresis on 10 % polyacrylamide gel. After staining with Coomassie blue, 50 different proteins were determined in the infected MDBK cells, whereas only 20 different proteins were observed in the control MDBK cells. However, precise analysis of viral proteins could not be carried out. Infected MDBK and VERO cell proteins, subjected to electrophoresis, were also examined by Western blot using immune rabbit serum. As a result, proteins at the molecular weights of approximately 55, 75 and 180 kDa were determined to be immunogenic proteins of BHV-1.