Floresan in situ hibridizasyon yöntemi ile kültüre edilmeyen ve kültüre edilen amniyositlerde cinsiyet kromozomları ve sayısal kromozom düzensizliklerinin saptanması

Abstract

ÖZET Bilindiği gibi, yenidoğanlarda gözlenen kromozom anomalilerinin çoğunluğu 13, 18, 21, X ve Y kromozomlarına ilişkin anöploidilerdir. Bu düzensizlikler prenatal olarak tanısı konan kromozom anomalilerinin % 95 ini oluştururlar. Amniyosentezden gerçekleştirilen tam karyotip analizi kromozom sendromları bakımından risk altında olan gebelerde uygulanan bir yöntemdir. Ancak zaman alıcıdır ve yoğun deneyim gerektirmektedir. FISH tekniğinin interfaz nükleuslarında kullanılabiliyor olması, kromozom anöploidiierinin araştırılmasında yeni bir çağ başlatmıştır. Bu çalışmada, kültüre edilmeyen amniositlerde kromozom X, Y, 13, 18 ve 21 e ilişkin 5 adet ticari prob (DXZ1, DYZ3, 13, 18, 21) kullanılarak fetal cinsiyet ve anöploidi tayini amaçlanmıştır. Amniyosentez için endike olan 35 gebeden alınan amniyotik sıvı örneği FISH ile değerlendirilmiştir ve elde edilen bulgular standart sitogenetik yöntemlerle karşı laştırılmıştır. Toplam 35 örneğin 33 ünde başarılı sonuç alınmış (% 94.3) olup bu 33 örneğin hepsinde fötal cinsiyet ve anöpioidik fötus tanısı, sitogenetik bulgular ile paralellik göstermiştir. Yanlış pozitif ve yanlış negatif bulgulara rastlanmamıştır. Ayrıca her prob için nükleustaki sinyal sayısı ve yoğunlukları değerlendirilmiştir. Bu araştırma, kültüre edilmemiş amniyotik sıvı hücrelerinde FISH tekniğinin güvenilir bir şekilde kullanılabileceğini ve özellikle ileri gebelik dönemlerinde fetal tanıya ulaşabilmek için tercih edilebileceğini göstermiştir. Anahtar kelimeler : Prenatal tanı, amniyosentez, kültüre edilmemiş amniyotik sıvı hücreleri, kromozom anomalileri, anöploidi, trizomi, cinsiyet kromozomları, floresan in situ hibridizasyon, interfaz sitogenetiği. vı

SUMMARY As it is known, the majority of chromosome abnormalities in newborn involve aneuploidies of chromosome 13, 18, 21, X and Y, account for 95 percent of all the chromosome abnormalities diagnosed prenatally. Full karyotype analysis from amniocentesis have been performed to the pregnancies at risk for chromosomal syndromes. However it is time consuming and labour-instensive. Fluoresence In Situ Hybridization (FISH) to interphase nuclei has opened a new age to investigating chromosome aneuploidies. In this study, we report the result of the first study evaluated the use of five commercially available DNA probes (DXZ1, DYZ3,13, 18, 21) for direct analysis of uncultured amniocytes. 35 amniotic fluid samples were analysed by FISH and the results were compared with the ones from standart cytogenetics. FISH allowed accurate sex and chromosome enumeration in 33 uncultured amniocytes (94.3%), consistent with the result obtained by traditional cytogenetic analysis. Neither false positive nor false negative results were obtained. Morover, the signals/nucleus for each probe was also evaluated. This experience demonstrates that FISH can provide a rapid and accurate clinical method for prenatal idendification of chromosome aneuploidies and sexes. Key words : Prenatal diagnosis, amniosentezis, uncultured amniotic fluid cells, chromosome aberrations, aneuploidy, trisomy, sex chromosomes, fluorescence in situ hybridization, interphase cytogenetics. VII