Çeşitli fiksasyon yöntemleri kullanarak (immersiyon fiksasyonu, perfüzyon fiksasyonu, mikrodalga fiksasyonu) beyin dokusunun incelenmesi

Abstract

Nöral doku histolojisi üzerinde yapmış olduğumuz bu çalışmamızda mikrodalga ışıması (MWI) tekniğini kullanarak en iyi sitomorfolojik korunmayı ve boyanma kalitesini elde etmeyi amaçladık ve diğer fiksasyon teknikleri ile mikrodalga ışıması eklenmiş fiksasyon tekniklerini karşılaştırdık. Toplam 24 adet, 90 günlük wistar albino sıçan beyni bu çalışmada kullanıldı ve bu hayvanlar dört gruba ayrıldı. (1) İmmersiyon Grubu: Beyin ve beyincik örnekleri 18 saat %10'luk nötral formalin içinde, oda sıcaklığında tutuldu. (2) Perfüzyon Grubu: Serum fizyolojik (3 Dakika) - %10'luk nötral formalin (15 Dakika) - Serum fizyolojik (3 Dakika) ardından 18 saat %10'luk nötral formalin içinde, oda sıcaklığında tutuldu. (3) İmmersiyon ve Mikrodalga Grubu: 4 saat %10'luk nötral formalin içinde, oda sıcaklığında tutuldu, ardından mikrodalga ışıması 2.450 MHz olarak, 5 Dakika, %80 Kapasitede 55C° final sıcaklıkta uygulandı. (4) Perfüzyon ve Mikrodalga Grubu: Perfüzyon ve mikrodalga ışıması, ikinci ve üçüncü grupta anlatılan şekilde yapıldı. Koronal olarak kesilen 3mm kalınlığındaki beyin dilimleri ve fraksiyonlanan beyincik örnekleri parafine gömüldü. Parafine gömülmüş örneklerden 5um'lik kesitler alındı ve bu kesitlere Hematoksilen-Eozin boyası, Nissl boyası, Klüver- Barrera boyası, Bielschowsky gümüşlemesi yapıldı. Stereolojik inceleme fraksiyonlama(fractionator) yöntemi ile beyincik korteksi üzerinde nükleolusu gözlenen Purkinje hücreleri sayılarak gerçekleştirildi. Eğer nükleoluslan gözlenmiyorsa o Purkinje hücreleri sayılmadı. Mikrodalga ışıması yapılan grupların histoloji boyamalarında mikrodalganın kötü bir etkisi gözlenmedi, bu gruplann(3., 4.) kesitlerinde immersiyon(L) ve perfüzyon(2) grubundakilerle kıyaslandığında daha az büzülme vardı ve boyanma kalitesi biraz daha iyiydi. Histolojik olarak gruplar arasında önemli bir fark yoktu ancak sitomorfolojik korunma en iyi perfüzyon gruplarında gözlenirken boyanma kalitesi en iyi mikrodalga guplarmda gözlendi.. Bu bulgulara ek olarak,gruplar arasında yapılan fraksiyonlama yönteminde ortalama Purkinje hücreleri sayısı 166.480-181.120 arasında bulundu. İstatistiksel olarak immersiyon grupları ile perfüzyon gruplarıarasında önemli düzeyde fark gözlenirken(p<0.01), immersiyon grupları ve perfüzyon gruplannın kendi aralarında istatistiksel bir fark bulunamadı(p>0.05). Perfüzyonlu gruplarda daha çok Purkinje hücresi sayıldı.ve istatistiksel olarak incelenmesinde anlamlı düzeyde fark bulundu(p<0.01) bunun nedeni hakkındaki görüşümüz perfüzyon gruplarında sitomorfolojik korunmanın immersiyon gruplarına göre daha iyi olması sebebiyle nükleoluslann daha iyi görülmesi stereolojik sayının artmasına neden olmuşturAnahtar Kelimeler: Mikrodalga ışıması, Nöral histoloji, immersiyon fiksasyonu, Perfüzyon fiksasyonu, Stereoloji, Fraksiyonlama.

We examined a rapid and optimal neural tissue fixation method using microwave fixation (MWI) for the excellent preservation of cytomorphology and staining quality, and, we compared the microwave effects on conventional fixation techniques. In this study, we used a 24 adult (90 days old) male wistar rat's brain and separated to four experimental groups. (1) Immersion Group: 18 h fixation in ten percent neutral formalin at room temperature. (2) Perfusion Group: Saline(3 min)- ten percent neutral formalin(15min)-saline(3min) and followed 18h fixation in ten per cent neutral formaline at room temperature. (3) Immersion and MWI Group: 4 h fixation in ten percent neutral formalin at room temperature followed by MWI fixation with 2.450MHz, 5 min, 80% Capacity at 55C°. (4) Perfusion and MWI Group: Perfusion and MWI fixation were performed as same as 2nd group and 3rd group, respectively. Coronally sectioned brain slices (3mm thickness) and fractionated cerebellum specimens embedded to paraffin. Paraffin embedded sections(5(im) were stained with Haematoxylin and Eosin, MssFs stain, Klüver-Barrera stain, Bielschowsky silver staining and also, we used fractionator technique for stereological examinations on the cerebellar cortex. The fractionator method was employed to estimate the total number of cerebellar Purkinje cell nucleoli. If each cell has one nucleolus, this number is equal to the number of Purkinje cells. This form of rapid heat fixation (MWI) had no deletorious effects on special neural stains, sectioned as well as immersion and perfusion fixed tissue blocks and less shrinkage artefacts observed in MWI groups(3rf and 4th ) than immersion and perfusion fixation groups(lst and 2nd). No significant histological difference between all groups, but cytomorphology preservation better in perfusion groups and staining quality better in MWI groups. In addition, we estimated mean number of Purkinje cell nucleoli varied between 166.480-181.120 for the all groups of studing animals and there was a significant statistically difference between perfusion groups and immersion groups (p<0.01) but no significant statistically difference between immersion groups(lst vu and 3rd ) and also, perfusion groups (2nd and 4th )(p>0.05). We found increased purkinje cells number in perfusion fixation groups than immersion fixation groups. Our commended that, this situation resulting from high cytomorphology quality in perfusion fixation groups.Key Words: Microwave irradiation(MWI), Neural histology, Immersion fixation, Perfusion fixation, Stereology, Fractionator.