Böbrek iskemi-reperfüzyonunda nötrofil aktivasyon markerlerinin incelenmesi

Abstract

ÖZET Böbreklerde iskemi reperfüzyon sonrası oluşan patolojik değişikliklerin en azından bir bölümünden nötrofillerin sorumlu olabileceği ileri sürülmektedir. Myeloperoksidaz polimorfonükleer hücreler için marker bir enzimdir ve nötrofil infiltrasyonunu göstermede önemlidir. Elastaz salınımı da nötrofil aktivasyonu ve oluşturduğu hasarın araştırılmasında önemli bir belirteçtir. Bu tez çalışmasında rat unilateral böbrek iskemi-reperfüzyon modelinde nötrofil aktivasyonunun araştırılması amaçlanmıştır. Bu amaçla myeloperoksidaz ve elastaz enzim aktiviteleri ölçülmüştür. Çalışmamızda onar rattan oluşan üç grup kullanıldı; kontrol grubu, 45 dk iskemiyi takiben 45 dk reperfüzyon grubu ve 45 dk iskemiyi takiben 12 saat reperfüzyon grubu. Tüm olgulara sağ unilateral nefrektomi uygulandı. Kontrol grubuna başka bir müdahale yapılmadan intrakardiak olarak kan örnekleri alındı. Diğer iki grubun sol böbrek renal venine 45 dk süreyle atravmatik klemp uygulandı. Bu süre sonunda klemp kaldırılarak 45 dk veya 12 saat reperfüzyonları sağlandı. Reperfüzyon periyodunun sonunda intrakardiak olarak kan örnekleri alındı. Tüm olguların plazma örneklerinde BUN, CRE, GGT, ALP, MPO ve Elastaz düzeyleri ölçüldü. Böbrek fonksiyonlarının göstergesi olan BUN düzeyleri 45 dk reperfüzyon grubunda kontrole göre hafifçe yükselmiş ise de istatistiksel olarak anlamlı fark 12 saat sonra reperfüzyon grubunda görülmüştür ( Her iki gruba göre p< 0.001). Benzer şekilde 12 saat reperfüzyon grubunun kreatinin düzeyleri de kontrol ve 45 dk reperfüzyon grubuna göre anlamlı düzeyde artmıştır (Her iki gruba göre p<0.01).GGT ve ALP aktivitelerinde reperfüzyon süresinin uzamasına paralel olarak yükselme gözlenmiş ise de istatistiksel olarak anlamlı düzeye ulaşmamıştır. MPO düzeyleri 45 dk reperfüzyon grubunda kontrol grubuna göre iki kattan fazla artmış ( p<0.001), ancak 12 saat reperfüzyon sağlanan grupta tekrar azalarak kontrol grubuna yaklaşmıştır. 12 saat reperfüzyon grubunun MPO aktivitesindeki bu azalma 45 dk reperfüzyon grubuna göre anlamlı bulunmuştur (p<0.001). Elastaz düzeyleri reperfüzyon süresinin uzaması ile birlikte artış göstermiş ise de gruplar arasında istatistiksel anlamlı bir farklılık oluşmamıştır. Sonuç olarak bu tez çalışmasında böbrek-iskemi reperfüzyonunda nötrofillerin aktive olduğu ve plazmaya granül içeriğinde bulunan enzimlerin salınımında bir artış olduğu saptanmıştır. Nötrofıl aktivasyonu ve MPO, elastaz enzimlerinin açığa çıkışındaki artış iskemi-reperfüzyon sırasında böbrek doku hasarının artmasından sorumlu tutulabilir.

SUMMARY It was declared that neutrophils are responsible at leasting part of the pathological changes occured after the ischemia-reperfusion of kidney. Myeloperoxidase is a marker enzyme for polymorphonuclear cells and important indicator of neutrophil infiltration. The release of elastase is also an important marker for the investigation of neutrophil activation and damage. In this thesis, we aimed to investigate the role of neutrophil activation in rat unilateral kidney ischemia-reperfusion model. For this aim, the activities of myeloperoxidase and elastase were measured. In our study, three groups each of them consisting 10 rats were used: control group, 45-minute-ischemia followed by a 45-minute-reperfusion group and 45-minute-ischemia followed by 12 hour-reperfusion group. Right unilateral nephrectomi was performed to all rats, intracardiac blood samples were obtained from control group rats without any other intervention. The left renal vein was clamped for 45 minutes with an atravmatic clamp in other two groups. At the end of this period, clamp was removed and reperfused for 45 minutes or 12 hours, intracardiac blood samples optained at the end of reperfusion periods. BUN, CRE, GGT, ALT, MPO ve elastase levels were measured in plasma samples of all rats. Although the BUN levels, the indicator of renal functions, were slightly increased in 45-minute-reperfusion group as compared to controls, the statistically significant difference was observed in 12-hour-reperfusion group (for both groups: p<0.001). Similarly, the creatinine levels of 12-hour- reperfusion group were significantly increased as compared to controls and 45- minute-reperfusion group (for both of this groups: p<0.01)GGT and ALP activities, were increased paralel to prolonged reperfusion period, however it didn't reach a statistically significant level. MPO levels were increased more than to fold in 45-minute-reperfusion group than those in control group (p<0.001), however, it decreased and approach to control levels in 12-hour-reperfusion group. This decrease in MPO activity of 12-hour-reperfusion group was significant as compared to 45-minute- reperfusion group (p<0.001). Although the levels of elastase were increased together with the prolonged reperfusion, a statistically significant different between groups were not observed. As a result, neutrophils were activated in kidney ischemia-reperfusion and the release of granular enzymes to plasma were determined in this thesis. The increase of neutrophil activation and release of MPO and elastase enzymes may be responsible from the increased kidney tissues injury during ischemia-reperfusion.