Subfertil erkeklerin sperm morfolojilerinin ışık mikroskobik ve floresan yöntemlerle incelenmesi

Abstract

ÖZET Bu çalışmada subfertil erkeklerin semen örneklerinde klasik semen parametreleri olan konsantrasyon, motilite ve morfoloji ile sperm çekirdeğinin DNA denatürasyonunu belirleyen akridin oranj testi (AOT) arasındaki ilişkinin belirlenmesi ve bu arada sperm ayırma tekniklerinden swim-up ile iki tabakalı perkol gradyen santrifugasyon yönteminin karşılaştırılması amaçlandı. Semen örneklerinde konsantrasyon ve motilite Dünya Sağlık Örgütü (WHO) kriterlerine göre belirlenirken, sperm morfolojisi kesin kriterlere göre belirlendi. AOT ile denature DNA'lı sperm başı kırmızı, nativ DNA'lı sperm başı ise yeşil floresans verdi. Bu işlemlerin tümü her hastanın ham semen örneğine ve swim-up ve perkol sonrası örneklerine uygulandı. Swim-up konsantrasyonu önemli oranda düşürdü, bol motil sperm kazandırdı ve morfolojiyi önemli derecede düzeltti. Perkol ise konsantrasyonu çok düşürmedi, motiliteyi arttırdı, fakat morfolojiyi yeterince düzeltemedi. AOT ile saptanan yeşil sperm yüzdesinin ne swim-up ve perkolde, ne de ham semende konsantrasyon ve motiliteyle bağıntısı saptanamadı. Morfolojiyle bağıntı sadece swim- up yönteminde önemliydi. Bu bulgulara göre, swim-up morfolojiyi ve motiliteyi perkole göre daha iyi düzeltmektedir. AOT kesin kriterlere göre yapılan morfoloji değerlendirmesiyle sıkı bağıntı göstermektedir. Özellikle in vitro fertilizasyon (İVF) olgularında erkek fertilitesinin belirlenmesinde bu testten yararlanılabilir. Anahtar Sözcükler: Erkek infertilitesi, Spermatozoa, Floresans mikroskobi, Akridin oranj, Sperm kromatini. vıı

SUMMARY In this study, we performed classical semen parameters such as, sperm concentration, sperm motility, sperm morphology and acridine orange test (AOT) for determination DNA denaturation in sperm nuclei. In addition, we aimed to compare swim-up and two layer gradient centrifugation (percoll) of sperm separation techniques. We used to World Health Organization (WHO) criteria for determination of sperm concentration and sperm motility. Determination of the sperm morphology performed according to strict criteria. In AOT sperm heads with native DNA appeared green, and sperm heads with denaturated DNA showed red to yellow flourescence. All procedures applicated to wet semen and after swim-up and percoll techniques. Swim-up technique decreased to sperm concentration, sperm recovery and we found significant morphologic improvement in swim-up technique than percoll technique. However percoll technique decreased to concentration, increased to sperm recovery compared with swim-up, but no morphologic improvement has seen as like as swim-up. We didn't find correlation between sperm concentration and sperm motility with green sperms percentage in swim-up and percoll techniques. The percent of the normal sperm morphology in swim-up showed a significant correlation with the percentage of the green sperms in the swim-up techniques, but not in percoll techniques. Our results suggest that, swim-up protected of sperm DNA integrity better than percoll processing. Key words: Infertility-Male, Spermatozoa, Fluorescence microscopy, Acridine orange, Sperm chromatin. vm