Astımlı hastalarda anjiyotensin konverting enzim (ACE) geni I/D polimorfizmi

Abstract

ÖZET Bu çalışmanın amacı; Eskişehir yöresinde astımlı hastalarda ACE gen polimorfizmi insidansmı belirlemek ve bu hastalık ile ACE gen polimorfızmi arasında gerçekten bir bağlantı olup olmadığını tesbit etmek ve aynı zamanda ACE gen polimorfizmi ile serum ACE aktivitesi arasında bir ilişki olup olmadığını belirlemektir. Çalışmada Osmangazi Üniversitesi Tıp Fakültesi Göğüs Hastalıkları Anabilim Dalında astım tanısı konmuş 100 astımlı hasta ile kontrol amacıyla 88 sağlıklı kişi ve yine Osmangazi Üniversitesi Tıp Fakültesi Göğüs Hastalıkları Anabilim Dalında kronik obstrüktif akciğer hastalığı (KOAH) tanısı konmuş 50 kişi olmak üzere toplam 238 kişiden oluşan araştırma grubu bireylerinden elde edilen genomik DNATar kullanıldı. Genomik DNATar venöz kandan tuz yöntemi kullanılarak elde edildi. Genomik DNATar ACE geninin 16. Lıtronunda 287 bp'lik DNA fragmentinin varlığı veya yokluğuna göre belirlenen I/D polimorfizminde genotipleri saptamak amacı ile, PCR yöntemi kullanılarak ACE ve ACEX primerleri ile amplifiye edildi. PCR ürünleri elektroforeze tabi tutularak CCD kamera ile değerlendirildi. Ayrıca serum ACE aktiviteleri de ACE kiti kullanılarak ölçüldü. Yapılan çalışmadaki veriler istatistiksel yöntemlerle analiz edildi. Gruplar arası genotipik karşılaştırmalar Ki kare testi yöntemi kullanılarak yapıldı. Genotip dağılıma göre, gruplar arası enzim aktiviteleri, tek yönlü varyans analiz yöntemi (ANOVA) ile değerlendirildi. Bu çalışma sonunda; ACE geni, I/D polimorfizmi genotipleri sağlıklı kontrol grubu bireylerde (n:88) II genotipi oranı %20, İD genotip oranı %63, DD %16 olarak belirlendi. Kontrol amacıyla almış olduğumuz KOAHTı hasta grubunda (n:50) II genotip oram %14, İD genotip oram %46, DD genotip oram % 40 olarak belirlendi. Astımlı bireylerde genotip dağılımı ise; II genotip oram %22, İD genotip oranı %48, DD genotip oranı %30 olarak belirlendi. Astımlı hasta grubundaki İD genotip oranında kontrol grubuna göre önemli derecede azalma gözlendi. vıııPlazma ACE aktiviteleri; sağlıklı kontrol grubu bireylerde ortalama 60,9 ± 2,12 U/L, kontrol amacıyla almış olduğumuz KOAH'lı hasta grubunda 64,96 ±3,06 U/L, sağlıklı kişiler ile KOAH'lı kişilerden oluşan kontrol grubunda 62,37 ± 1,75 U/L ve astımlı bireylerde 67,2 ±1,95 U/L olarak belirlendi. Sonuçta, ACE aktivitesi yönünden kontrol grubu bireyler ile astımlı hasta bireyler arasında önemli bir farklılık gözlenmedi. Genotipler arası ACE aktivitesi ise sağlıklı kontrol grubunda, II genotipine sahip bireylerde, ortalama 70,57 ± 5,22 U/L, İD genotipine sahip bireylerde 61,9 ± 2,7 U/L, DD genotipine sahip bireylerde 70,57 ± 5,22 U/L, kontrol amacıyla almış olduğumuz KOAH'lı hasta grubunda ACE aktivitesi, II genotipine sahip bireylerde 50,57 ± 4,9 U/L, İD genotipine sahip bireylerde 62,30 ± 4,27 U/L, DD genotipine sahip bireylerde 73,05 ±5,05 U/L. Sağlıklı kişiler ile KOAH lı kişilerden oluşan kontrol grubunda II genotipine sahip bireylerde bu aktivite 50,4 ± 2,6 U/L, İD genotipine sahip bireylerde 62,01 ± 2,2 U/L, DD genotipine sahip bireylerde 72,02 ± 3,6 U/L. Astımlı hasta grubunda ise, II genotipine sahip bireylerde, enzim aktivitesi, ortalama 57 ± 3,1 U/L, İD genotipine sahip bireylerde 65,37 ±2,4 U/L DD genotipine sahip bireylerde ise 77,6 + 4,1 U/L olarak belirlendi. Sonuç olarak; kontrol grubuna göre, astımlı hastalarda İD genotipinde önemli derecede bir azalma gözlendi. Gruplar arası ACE gen genotip dağılımı ile ACE aktivitesi karşılatırıldığmda, II genotipine sahip bireylerdeki ACE aktivitesinin DD genotipine sahip bireylerdeki ACE aktivitesine göre önemli derecede azaldığı gözlendi. Kontrol grubuna göre, astımlı hastaların ACE aktivitesinde artma gözlenmekle birlikte önemli bir farklılık belirlenemedi. Anahtar kelimeler: ACE Geni, ACE, Astım, I/D polimorfizmi, PCR IX

SUMMARY The aim of this study is to detect the insidance of ACE gene polimorphysm in the asthmatic patients in Eskişehir region, and to examine whether there is an association between the disease and ACE gene polimorphysm with ACE gene polymorphysm and serum ACE levels. In our study the genomic DNA of total 238 individuals that of 100 asthmatic and 50 chronic obstructive lung disease patients diagnosed, in Osmangazi University, Medical Faculty, Department of Chest Diseases, was used. As the control group 88 healthy subjects were analysed. Genomic DNA was prepared from peripheral blood by using SALT method. The intron 16 of ACE gene was amplified by PCR method using primers ACE and ACEX to examine the presence and absence of a 287 bp DNA fragment that showed I/D polymorphysm genotypes. PCR products were seperated by agorose gel electrophoresis and visualized by CCD camera. Plazma ACE activity levels were measured by using ACE kit. The results were evaluated statistically by using chi square test and one-way analysis of variance (ANOVA). Among the healthy control group (n=88), the distribution of II, ID and DD genotypes was 20 %, 64 % and 16 % respectively. Among the control group of patients (n=50) with chronic obstructive lung disease, the distribution of II, ID and DD genotypes was 14 %, 46 % and 40 % respectively. The distribution of II, ID, DD genotypes of asthmatic patient was 18,11 %, 54,24 % and 24,6 % respectively. The prevalence of ID genotype in asthmatic patients was found to be significantly decreased when compared with that of the control group. Plasma ACE levels were measured as 57 ± 3.1, 65.37 ± 2.4, and 77.6 ± 4.1 U/L in the healthy control group, chronic obstructive lung disease patients that were taken as control and healty subjects with chronic obstructive lung disease patients, respectively.There was no significant difference according to plasma ACE levels between control group subjects and asthmatic patients. When we compared the plazma ACE activity levels according to genotypes the results were as follows; in healthy control group subjects; 50.33 ±3.19, 61.9 ± 2.7 and 70.57 ± 5.22 U/L in II, ID and DD genotypes respectively, in patients with chronic obstructive lung disease, taken as control; 50.57 ± 4.9, 62,30 ± 4.27 and 73.05 ± 5.05 U/L, in II, ID and DD genotype respectively, in healthy subjects together with control patients; 50.4 ± 2.6, 62.01 ± 2.2, 72.02 + 3.6 U/L, in II, ID, DD genotypes respectively, and in asthmatic patients group 57 + 3.1, 65.37 ± 2.4, 77.6 ± 4.1 U/L in II, ID. DD genotypes respectively. As a result, a significant decrease in the prevalence of ID genotype in asthymatic patients was detected when compared with control groups. In addition, there were a significant decrease on the levels of ACE activity of individuals that have II genotypes of all groups according to individuals that have DD genotypes of all groups. Howewer, there was a significant decrease according to the results of ACE levels in II genotypes of all groups Key words: ACE gene, ACE, Asthma, I/D polymorphism, PCR XI