Akut lösemili hastalarda çoklu ilaç rezistansını (MDR) değerlendirmede akım sitometri (FCM) ve polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) yöntemlerinin karşılaştırılması

Abstract

ÖZET Bu çalışmanın amacı akut lösemili hastalarda P-gp pozitifliğini, çoklu ilaç direnci proteinlerinden MDR1, MRP, LRP mRNA' sının kantitasyonunu ve bu parametrelerin birbirleri ile ilişkisini araştırmaktır. 26 yeni tam lösemik hastada (18 ANLL, 8 ALL) kemik iliği örneklerinde akün sitometri ile P-gp pozitifliği, RT-PCR ile de MDR1,MRP, LRP mRNA düzeyleri saptandı. P-gp analizi için Mouse IgG2a PE, P-gp 170 kd PE, CD45 Per Cp monoklonal antikorlar kullanıldı. RT-PCR için kemik iliğinden RNA izole edildi ve RT-PCR (AMV) için Roche 1st cDNA sentez kiti kullanılarak RNA'dan cDNA elde edildi ve MDR1, MRP, LRP Metis Bioteknoloji primer ve problan MDR1, MRP, LRP kantitasyonu için kullanılarak Roche Light Cycler sistemi ile düzeyleri ölçüldü. P-gp pozitifliği 26 lösemik hastanın % 65 'inde, 18 ANLL'li hastanın % 56'sında, 8 ALL'li hastanın % 88'inde ; ALL'li hastalarda MDR1 ekspresyonu 0,004 ± 0,001, ANLL'li hastalarda 0,005 ± 0,001, kontrol grubunda 0,000 ± 0,000 bulundu. MRP ekspresyonu ALL'li hastalarda 0,018 ± 0,007, ANLL'li hastalarda 0,014 ± 0,004, kontrol grubunda 0,002 ± 0,004 saptandı. LRP ekspresyonu ALL'li hastalarda 0,008 ± 0,001, ANLL'li hastalarda 0,007 ± 0,002, kontrol grubunda 0,096 ± 0,092 saptandı. Bulgularımız akut lösemili hastalarda P-gp pozitifliğinin olduğunu, MDR1, MRP mRNA seviyelerinin arttığım fakat LRP'nin artmadığım ve P-gp pozitifliği artmış MDR1, MRP, LRP mRNA düzeyleri arasında ilişki olmadığım göstermiştir. Anahtar Kelimeler: Akut lösemi, akım sitometri, RT-PCR, çoklu ilaç direnci, MDR1, MRP, LRP, P-gp.

SUMMARY The purpose of this study, was to determine the incidence of P-glycoprotein (P-gp) positivity and quantitation of mRNA of Multidrug resistance-related protein (MDR1), multidrug resistance-asssociated protein (MRP), lung resistance protein (LRP) and relationship each others in patients with acute leukemia. In 26 new diagnosed leukemic patients (18 ANLL, 8 ALL), P-gp positivity by flow cytometry, MDR1, MRP ve LRP mRNA levels by real time (RT) PCR were detected in bone marrow samples. For analysis of P-gp, mouseIgG2a PE, P- gp (170 kd) PE ve CD45 Percp monoclonal antibodies were used. For RT-PCR, RNA isolated from bone marrow blasts and cDNA obtained from RNA by using Roche 1st cDNA Synthesis kit for RT-PCR(AMV) and MDR1, MRP, LRP were detected by Roche Light Cycler System by using Metis Biyotechnology primers and probes for MDR, MRP ve LRP quantitation. P-gp positivity was detected in 65% of 26 leukemic patients, in 56 % of 18 ANLL, in 88 % of 8 ALL. MDR-1 expression was 0,004 ± 0,001 in ALL patients, 0,005 ± 0,001 in ANLL patients, 0,000 ± 0,000 in control group. MRP expression was 0,018 ± 0,007 in ALL patients, 0,014 ± 0,004 in ANLL patients, 0,002 ± 0,004 in control group. LRP expression was 0,008 ± 0,001 in ALL patients, 0,007 ± 0,002 in ANLL patients, 0,096 ± 0,092 in control group. Our findings indicate that there are P-gp positivity, increased MDR-1, MRP mRNA levels in patients with acute leukemia but LRP does not and there was no correlationship among P-gp positivity, increased MDR, MRP mRNA levels. Key Words: Acute leukemia, flow cytometry, RT-PCR, multi drug rezistance, MDR1, MRP, LRP, P-gp.