Ratlarda adacık hücreleri ile kokültüre edilen luteal hücrelerin, hücre canlılığı, revaskülarizasyon ve immun yanıta etkileri

Abstract

Diyabet tedavisinde çeşitli tedavi yöntemleri denenmiş olmasına rağmen, uzun dönem komplikasyonları önleyebilecek ve kişinin hayat standartlarını yükseltebilecek yeni tedavi yöntemleri aranmaya devam etmektedir. Bu alternatiflerden biri olan pankreas adacık hücrelerinin nakli, gelecek için diyabet tedavisinde bir umut olmaya devam etmektedir. Bu amaçla, luteal hücreler ve adacık hücreleri izole edilerek, hem ayrı ayrı hem de birlikte kültüre edildi. Hücrelerin birlikte inkubasyonunun 0. 48. ve 96. saatlerinde adacıklara canlılık ve glukoz stimülasyon testleri yapıldı, total insülin salınımları belirlendi, ayrıca luteal hücre ve kokültür medyumlarında progesteron, VEGF, bFGF ve IL-10 düzeyleri ölçüldü. Adacık hücre kültürlerinde de progesteron hariç diğer parametrelerin ölçümü yapıldı. Adacık hücrelerinde damarlanmanın başlayıp başlamadığı da CD 31 markırı ile belirlendi. Ayrıca, pratikte 48 saatlik bir kültürden sonra infüze edilen adacık hücrelerinin, luteal hücre salgılarının etkisiyle daha uzun süre kültüre edilebilirlikleri araştırıldı. Adacık hücrelerinin canlılığı ve fonksiyonelliğinin, luteal hücreler ile kültüre edilmiş grupta 48. saatte arttığı görüldü (P<0.05). Damarlaşmanın belirtisi olarak VEGF hem 48 hem de 96. saatlerde luteal hücreler ile kokültüre edilen grupta yüksek bulundu (P< 0,001). bFGF değeri ise 96. saatteki kokültür grubunda adacık grubuna kıyasla istatistiksel olarak anlamlı bulundu (P< 0.001). Hem 48. saatte hem de 96. saatlerdeki adacık grupları ve kokültür grupları karşılaştırıldığında kokültür gruplarında CD 31 düzeyinin yükseldiği görüldü (P<0.05). IL-10 düzeyi ise 48. saatte adacık grubuna kıyasla kokültür grubunda daha azalmışken 96. saatte tam tersi etki ederek kokültür grubunda adacık grubuna göre anlamlı olarak yükseldi (P< 0,001). Luteal hücrelerin salgıladıkları progesteron düzeyleri inkubasyonun 48. ve 96. saatlerinde artmış olmasına karşın inkübasyonun ne 48. saat ne de 96. saatlerinde kokültür gruplarıyla luteal hücre grupları arasında istatistiksel bir farklılık gözlenmedi. Sonuç olarak, rutin prosedürde 48 saat inkübasyondan sonra aktarımı yapılan adacık hücrelerinin luteal hücreler ile kokültüre edildiklerinde canlılık ve fonksiyonelliklerini koruyarak 96 saate kadar inkübe edilebildikleri ve bu kokültürün etkisiyle adacık hücrelerinde damarlaşmayı uyaran CD-31, VEGF ve bFGF düzeylerinin kokültür ortamında arttığı belirlenmiştir. Bu sonuçların, adacık hücrelerinin naklinden sonra bölgede bir an önce damarlaşmanın başlatılması ve adacıkların canlılıklarının ve fonksiyonlarının korunarak insülin salınımının başlatılması için luteal hücreler ile kokültüre edilmiş biçimde aktarımının yapılabileceğini göstermesi açısından son derece önemli olduğu düşünülmektedir.

Although various treatment methods have been tried in the treatment of diabetes, new treatment methods that could prevent long-term complications and improve people's living standards still continue to be sought. One of these alternatives is the transplantation of pancreatic islet cells, remain a hope to treat of diabetes for the future. For this purpose, luteal cells cultured separately and together with islet cells and the islets viability and glucose stimulation tests wperformed and total insulin secretion determined in the islet medium and cocultur medium, and progesterone, VEGF, bFGF and IL- 10 levels measured in luteal cell medium and cocultur medium at 0 th, 48 th and 96 th hours. Also, the latter prameters except progesteron measured in islet cell cultures at the same incubation time and CD 31 marker in islet cells determined for observing the revascularization. In addition, whether infused islet cells after 48 hours culture in practice, cultured more than 48 hours in culture by the effect of luteal cell secretion investigated. It was observed that islet cocultured with luteal cell group's islets increased viability and function than islet group (P<0.05). VEGF, as a sign of vascularization, was observed at both 48 and 96 hours found to be higher in the cocultured group with luteal cells (P< 0,001). bFGF value was statistically significant at the 96. hour in the coculture group compared to the islet group (P< 0,001). When compared with islet groups and cocultural groups at both the 48. hour and the 96. hour observed that CD 31 level was increased in coculture groups (P<0.05). IL-10 levels were lower in coculture group compared to the islet group at 48 hours and it increased significantly in the coculture group compared to the islet group by the opposite effect at 96 hours (P< 0,001). Although progesterone levels secreted by luteal cells increased during the 48th and 96th hours of incubation no statistically significant difference was observed between the luteal cell groups and the coculture groups at either 48 or 96 hours of incubation. As a result, the routine procedure is that after 48 hours of incubation, the transferred islet cells are cocultured with luteal cells can be kept up to 96 hours while maintaining their viability and functionality and it was determined that CD-31, VEGF, and bFGF, which stimulate vascularization in islet cells, increase with this coculture effect. These results suggest that cocultured form immediately contributing start of the vascularity after transplantation of the islets and maintaining the viability and functionalities of the islets to the initiation of insulin secretion is extremely important from the point of view that luteal cells can be transplanted.