Ratlarda luteal hücrelerden kök hücre elde edilebilirliğinin araştırılması

Abstract

Bu araştırma, sıçan korpus luteumlarından elde edilen luteal hücrelerin kök hücreye dönüşüp dönüşmediklerini incelemek amacıyla yapıldı. Şimdiye değin, mezenkimal kökenli kök hücre elde etmek için, kemik iliği, diş pulpası, adiposit doku gibi farklı dokular kullanılmış olup, bu çalışma luteal kökenli kök hücre elde etmek için yapılan ilk araştırmadır. Bu amaçla, süperovulasyon yapılmış sıçan ovaryumlarından önce mekanik, sonra enzimatik işlemlerle luteal hücre süspansiyonu elde edildi ve hücreler Percoll gradient yöntemi ile saflaştırıldı. Elde edilen luteal hücreler her birinde 105 hücre olacak şekilde mezenkimal kök hücre medyumu içerisinde T25 hücre kültür kaplarında %5 CO2 içeren 37 ° C lik inkübatörde inkübe edildi. İkinci pasajın sonuna gelen hücrelerin bir kısmı ile flow sitometride tanımlama işlemi yapılırken, bir kısmı da başkalaşım medyumlarında inkübe edilmek üzere ayrıldı. Elde edilen hücrelerin CD11b ve CD45 yüzey markırlarının yönünden negatif, CD90 ve CD49 yüzey markırları yönünden de pozitif oldukları gözlendi. Adipogenez ve osteogenez farklılaşma kitleri kullanılarak luteal hücreden dönüşen kök hücrelerin yağ dokuya ve kemik dokuya başkalaşımları gösterildi.Bu sonuçlar, erişkin rat luteal hücrelerinin multipotent özellikteki erişkin stromal mezenkimal kök hücrelere dönüşebildiği hipotezini doğrulamaktadır. Bunun yanında korpus luteumdan elde edilecek kök hücrelerin özellikle dişilerde üreme sistemi hastalıklarında ve yapılması olası klinik çalışmalar için kök hücre kaynağı olarak kullanılabileceğini düşündürmektedir.

This study performed to investigate whether luteal cells from rat corpus luteum differentiate into stem cells or not. So far, different tissues such as bone marrow, dental pulp, and adipocyte tissue have been used to isolate mesenchymal stem cells. This is the first research to isolate stem cells originated from luteal tissue.Luteal cell suspension isolated from superovulated rat ovaries by mechanical and enzymatic processes and the isolated cells were purified by Percoll gradient method. Isolated luteal cells were incubated in T25 flasks which each including 105 cells and mesenchymal stem cell medium at 37 °C with 5 %CO2 at the end of the second passage. One part of the cells was used to determination of phenotypical characteristics of the cells and other part of them was incubated to treat differentiation medium. Isolated cells have negatively reacted for CD11b and CD45 surface markers and positively reacted for CD90 and CD49 surface markers. To differentiation into osteocytes and into the adipose tissue of the cells has been shown in osteocyte and adipocyte differentiation media. These results support that the stem cells derived from the corpus luteum may also be used as stem cell sources especially in reproductive system diseases in the ovary, and may be a source for possible clinical trials; and support the hypothesis that adult rat luteal cells differentiate into adult stromal mesenchymal stem cells.